[发明专利]同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂及试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂，其特征在于，包括：

用于扩增EV71型肠道病毒的上游引物EV71F1，所述上游引物EV71F1的序列为SEQ ID No.1所示的序列；

用于扩增EV71型肠道病毒的下游引物EV71R1，所述下游引物EV71R1的序列为SEQ ID No.2所示的序列；

用于检测EV71型肠道病毒的探针EV71P1，所述探针EV71P1的两端分别结合有第一荧光报告基团和第一荧光淬灭基团；

用于扩增A6型柯萨奇病毒的上游引物CA6F2，所述上游引物CA6F2的序列为SEQ ID No.3所示的序列；

用于扩增A6型柯萨奇病毒的下游引物CA6R2，所述下游引物CA6R2的序列为SEQ ID No.4所示的序列；以及

用于检测A6型柯萨奇病毒的探针CA6P2，所述探针CA6P2的两端分别结合有第二荧光报告基团和第二荧光淬灭基团，所述第一荧光报告基团与所述第二荧光报告基团不同。

2.根据权利要求1所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂，其特征在于，所述探针EV71P1的序列为SEQ ID No.5所示的序列。

3.根据权利要求1所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂，其特征在于，所述探针CA6P2的序列为SEQ ID No.6所示的序列。

4.根据权利要求1所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂，其特征在于，所述第一荧光报告基团和所述第二荧光报告基团均选自FAM荧光基团、ROX荧光基团、VIC荧光基团、JOE荧光基团、TET荧光基团、CY3荧光基团、CY5荧光基团、Texas Red荧光基团和LC RED640荧光基团中的一种；所述第一荧光淬灭基团和所述第二荧光淬灭基团均选自BHQ1淬灭基团、BHQ2淬灭基团、BHQ3淬灭基团、Dabcy1淬灭基团和Tamra淬灭基团中的一种。

5.根据权利要求1所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂，其特征在于，所述探针EV71P1的5’端结合有第一荧光报告基团，所述探针EV71P1的3’端结合有第一荧光淬灭基团，所述第一荧光报告基团为FAM荧光基团，所述第一荧光淬灭基团为BHQ1淬灭基团。

6.根据权利要求1所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂，其特征在于，所述探针CA6P2的5’端结合有第二荧光报告基团，所述探针CA6P2的3’端结合有第二荧光淬灭基团，所述第二荧光报告基团为VIC荧光基团，所述第二荧光淬灭基团为BHQ1淬灭基团。

7.根据权利要求1所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的检测试剂，其特征在于，所述上游引物EV71F1、所述下游引物EV71R1、所述探针EV71P1的摩尔比为1:1:1，所述上游引物CA6F2、所述下游引物CA6R2、所述探针CA6P2的摩尔比为3:3:2，所述探针EV71P1与所述探针CA6P2的摩尔比为1:1。

8.一种同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1～7任一项所述的检测试剂。

9.根据权利要求8所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应液、酶混合液、阳性对照品以及阴性对照品。

10.根据权利要求9所述的同时检测EV71型肠道病毒和A6型柯萨奇病毒的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括终浓度为20mmol/L～30mmol/L的MgCl₂和终浓度为5mmol/L～15mmol/L的dNTPs；所述酶混合液包括热启动Taq酶和MMLV逆转录酶；所述阳性对照品为灭活的EV71型肠道病毒及A6型柯萨奇病毒的病毒培养液；所述阴性对照品为去RNA酶的无菌水。