[发明专利]氨基官能团手性化合物拆分标记带荧光衍生化试剂

说明书

本发明涉及氨基官能团手性化合物拆分标记新型荧光衍生化试剂，具体指DBD‑trans‑2‑methyl‑L‑proline(DBD‑M‑Pro)，DBD‑(2‑succinimidoxy)‑trans‑2‑methyl‑L‑proline(DBD‑S‑M‑Pro)试剂。这两种试剂含有荧光基团苯并氧化呋咱(benzofurazan)及一个手性中心结构，可对氨基官能团手性化合物进行荧光标记，利用液相色谱‑荧光检测（LC‑FL）技术，建立氨基官能团手性化合物拆分高灵敏、高选择性的分析方法。因本试剂本身带有荧光基团，可在荧光检测器中能显著提高检测灵敏度，另外可在反相色谱中进行氨基官能团手性化合物的手性拆分，为氨基官能团手性代谢物的拆分研究及各种疾病手性生物标志物的筛选提供新型高灵敏度荧光手性衍生化试剂。

技术领域

本发明涉及生物分析领域的含氨基官能团手性代谢物分析，特别是指氨基官能团手性化合物的手性拆分用高灵敏度新型荧光衍生化试剂。

背景技术

手性（Chirality）是生物体系的一个基本特征，在药学领域尤为突出。在许多情况下，两个异构体药物的生物活性如药效和药代动力学，有时会有显著的差异。手性又是许多内源性代谢物重要的特征。为了准确地筛选真正有效的手性生物标志物，利用液相色谱-荧光检测（LC-FL）技术，发展和建立高灵敏的手性代谢物分离分析方法，对于在药物毒性和机理研究、疾病诊断和基因功能的阐明、药物成分的安全性评价和体内手性代谢组学研究具有重要意义。

生物体内存在多种多样的如氨基酸、乳酸等光学异构体低分子代谢物，人类一直认为只有一方的光学异构体具有生理活性。可随着分析技术的进步和发展，1980年以后，发现了存在于生物体内的D-氨基酸如：D-Ser, D-Asp, D-Val, D-Leu, 2007年又在大白鼠的胰腺细胞中发现大量的D-Ala，并且对于血糖指数起到一定的控制作用。因此，D-氨基酸逐渐被认知为是内源性代谢物，作为新的生理活性物质、疾病诊断的生物标志物在代谢组学和诊断疾病领域倍受关注，但这些已知的D-氨基酸仅限于少数分子。对手性代谢生物标志物的筛选及针对光学异构体与疾病关联性的研究还处在起步阶段。

常用的手性分离测定技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、毛细管电泳(HPCE)、超临界液体色谱(SFC)等。其中HPLC是使用最为广泛，有效的方法之一。HPLC分离分析对映体分为直接法和间接法。直接法具有操作简便，分析过程中较少发生消旋化，添加剂选择的范围较宽，但系统平衡时间较长，添加剂消耗较大，通用性差。间接法是手性对映体在分离前，先与高光学纯度衍生化试剂反应形成非对映体，再进行色谱分离测定。间接法虽然涉及样品的衍生化反应使分析时间延长、对衍生化试剂有对映体的衍生化反应迅速且反应速率一致等较高的要求。但分离时可用价廉、柱效高的非手性柱，反应时可选择衍生化试剂提高检测灵敏度，因而在实际样品中微量分析方面更受欢迎。至今的手性衍生化试剂针对荧光检测为目标的试剂如：氨基类衍生化手性荧光试剂有NBD-PyNCS、DBD-PyNCS、DBD-L(D)-Pro,DBD-trans(cis)-4(3)-hydroxy-L(D)-proline等，任何试剂都与目标氨基官能团在缓和的条件下反应生成非对映体，可在廉价的ODS柱上能一定程度地拆分包括手性氨基酸的氨基官能团化合物。但这些荧光衍生化试剂对20种氨基酸中19种手性氨基酸尚未达到完全手性拆分的效果。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有荧光手性衍生化试剂对20种氨基酸中19种手性氨基酸尚未达到全部手性拆分的不足，提供一种氨基官能团手性化合物拆分标记带荧光衍生化试剂，即本身带有荧光基团及一个手性中心结构，靶向标记带有氨基官能团手性化合物，并在廉价的反相色谱柱上可拆分19种手性氨基酸的新型高灵敏度荧光手性衍生化试剂。

为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：