[发明专利]一种多花黄精组织培养与快速繁殖的方法

说明书

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及多花黄精组织培养与快速繁殖的方法。本发明公开了一种多花黄精组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：（1）多花黄精茎段的消毒和接种：取当年抽出的多花黄精新茎，剪成带腋芽的中度木质化茎段进行接种；（2）丛生芽的诱导；（3）不定芽的增殖；（4）再生植株的生根培养；（5）炼苗移栽。在上述步骤中采用了不同成分及配比的培养基。采用本发明的方法，能够快速地获得多花黄精植株，利于产业化生产。采用本发明方法，多花黄精丛生芽的不定芽诱导率高达91.7%，不定芽数9.5，不定芽增殖倍数可达8.6，植株移栽成活率可达95%以上。

技术领域

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及多花黄精组织培养与快速繁殖的方法。

背景技术

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)，为百合科黄精属多年生草本植物，分布于江苏、安徽、浙江、江西、湖南、福建、广东(北部)，生于林下、灌丛或草坡的阴湿肥沃土壤中，因其根状茎在当地以黄精入药而大量种植，同时也可食用。目前在生产中多花黄精的繁殖采用种子和根状茎，主要以根状茎为主，存在着繁殖系数低、繁殖周期长的缺点，因此建立多花黄精的组培快繁体系，是实现其产业化生产的又一有效途径。

目前对于百合科黄精属开展的组织培养主要集中于多花黄精和黄精，采用的外植体主要为根状茎或由根状茎产生的芽。由于根状茎生长于地下，表面带有很多杂菌，且还存在内生菌，故其污染率的控制相对较难，此外消毒后需要很长时间才能诱导出不定芽。基本上所有黄精属植物组织培养的报道采用的最佳基本培养基均是不同浓度的MS培养基，其中诱导生根前的过程主要采用MS培养基，也有采用1/2MS进行不定芽诱导的报道；诱导生根时主要采用1/2MS培养基，也有采用MS培养基的和1/3MS培养基。黄精属不定芽的诱导甚至愈伤组织的诱导经常用到了细胞分裂素6-BA，多篇文献报道6-BA使用的最佳浓度为4.0mg/L；生根培养中单独使用生长素或其组合，甚至有2，4-D可促进生根的报道。目前多花黄精以花瓣为外植体的组织培养和快速繁殖未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种成活率高，利于实现产业化生产的多花黄精组织培养与快速繁殖的方法。

为实现本发明之目的，采用以下技术方案予以实现：一种多花黄精组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：

(1)多花黄精花蕾的消毒

于当年5月取尚未开花的多花黄精的花蕾，放入冰箱4℃低温冷藏0-48h，取出后加入适量的洗洁精溶液浸泡2min，用流水冲洗0.5-1.0h后，在超净台里将茎段转入70％的酒精溶液中浸泡1min，用无菌水冲洗3次，浸入滴加有5滴吐温-80，质量分数为0.1％的HgCl₂溶液内浸泡消毒9-10min，然后用无菌水充分浸洗3次，得到消毒完的外植体材料。

(2)丛生芽的诱导

将上一步得到的外植体材料放到无菌滤纸上，切去头尾，去除雄蕊和雌蕊，将花瓣切成2cm²大小，接于添加TDZ 0-2.0mg/L，NAA 0-1.0mg/L，AC 0-2.0g/L的SH基本培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30g/L，琼脂添加量为8.0g/L，pH为5.8-6.0，培养基曾于121℃下灭菌20min，下同。接好花瓣的培养基置先于黑暗中培养0-7d，培养温度为28±2℃；随后转入光照培养，培养条件为：培养温度为(28±2)℃，光照时间为14h光/10h暗，光照强度30-40μmol/(m²·s)；

(3)不定芽的增殖