[发明专利]一种经黏膜使用的HSV‑2DNA疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程和免疫学领域，具体涉及一种HSV-2 DNA疫苗，更具体地说，涉及一种用于黏膜免疫的HSV-2 DNA疫苗，该疫苗的制备方法以及该疫苗的预防性和治疗性应用。

背景技术

单纯疱疹病毒2型(HSV-2)作为生殖器疱疹的主要病原体，至今尚未有安全、有效的预防性疫苗问世。流行病学及病原学调查资料表明，生殖器疱疹全球每年的发病人数约为2300万，HSV-2感染能够增加至少3倍的HIV-1感染几率，并能够加速艾滋病的进程。更为严重的是，HSV-2感染后会导致终生潜伏感染和再发感染，造成了较重的经济负担和广泛的社会心理影响。经过科学家20多年的基础研究及临床实验，理想的HSV-2疫苗应能够清除通过黏膜部位进入机体的病毒而不产生新的感染，或者清除潜伏的病毒，这为HSV-2预防性疫苗的研发指明了研究方向。

HSV-2是通过侵染生殖道浅表的黏膜部位及入侵深层黏膜组织来实现感染的，因此，对于HSV-2的预防，除了黏膜局部中和抗体的中和病毒的作用，细胞免疫对病毒的防御起了更重要的作用。动物实验证明，T细胞免疫及其长期记忆性是研制HSV-2疫苗的关键，也是疫苗研究急需解决的科学难题。虽然HSV-2的gD是中和抗体和T细胞的靶蛋白，但是，gD的DNA疫苗及蛋白苗的免疫原性低，有不能建立长期免疫的缺点，需要借助理想的佐剂和适当的免疫途径来增强其免疫原性或改变免疫反应的类型，更有助于建立理想的免疫。但前期疫苗的III期临床试验证明，疫苗的有效性仅达38％，大部分佐剂仅对体液免疫有明显的增强效果。

近年来，趋化因子作为分子佐剂得到了广泛的重视。趋化因子是动物体内正常存在的分子，副反应小，作为分子佐剂可以诱导改变免疫反应的强度和类型，目前已发现多种趋化因子具有佐剂效应，但其详尽的作用机制尚不是十分清楚。趋化因子CCL28与受体分子CCR10结合，在天然免疫和适应性免疫中都发挥了重要的作用，其主要功能是招募淋巴细胞定向迁移到淋巴组织和促进IgA抗体在大肠及乳汁中分泌，利用这一功能可以将CCL28作为分子佐剂促进疫苗的细胞免疫及黏膜免疫。目前，对CCL28佐剂效应的研究主要集中在其增强抗原特异性免疫反应和记忆性免疫方面，Hu Kai等研究发现，CCL28更倾向于将响应B细胞迁移至脾脏及肠系膜淋巴结(MLNs)，作为分子佐剂不仅在黏膜局部增强免疫应答，还可增强全身性的体液免疫及细胞免疫应答(Hu，K.，Luo，S.，Tong，L.，Huang，X.，Jin，W.，Huang，W.，Du，T.，Yan，Y.，He，S.，Griffin，G.E.，Shattock，R.J.，Hu，Q..CCL19and CCL28Augment Mucosal and Systemic Immune Responses to HIV-1gp140by Mobilizing Responsive Immunocytes into Secondary Lymph Nodes and Mucosal Tissue[J].the Journal of Immunology，2013，191(4)：1935-47.)。Nagakubo D等研究发现，CCL28能够协助更多的记忆性CD4+T细胞在鼻腔的黏膜部位定居，有助于建立长期的免疫记忆(Nagakubo，D.，Yoshie，O.，Hirata，T..Upregulated CCL28expression in the nasal mucosa in experimental allergic rhinitis：Implication for CD4⁺memory T cell recruitment[J].Cellular immunology，2016，S0008-8749(16)：20008-9.)。

发明专利CN 103864902 B公开一种包含HSV-2 gD或gB包膜蛋白核苷酸序列以及佐剂CCL19或CCL28核苷酸序列的双价DNA疫苗，其免疫途径为肌肉注射，应用过程中不但需要媒介来介导DNA质粒注射肌肉后转染至细胞，可能需要借助特殊的设备，操作繁琐，使用不方便，因此针对该种疫苗在临床上目前尚没有理想的推广办法，在一定程度上限制了HSV-2型DNA疫苗的应用。此外，该种肌肉注射型DNA疫苗未充分利用HSV-2感染途径的特殊性即黏膜感染，其在体液免疫，尤其是细胞免疫以及黏膜免疫的调动能力和免疫效果上还需要进一步增强和提高。

综上，需要寻找更为理想的HSV-2疫苗来充分调动细胞免疫及黏膜免疫来预防和治疗HSV-2病原体的感染。

发明内容