[发明专利]一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器的制备方法

权利要求书

1.一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）PDANS@Ag的制备

80~120 mg盐酸多巴胺加入到80~120 mL pH = 8.8的Tris-盐酸缓冲溶液与30~70 mL异丙醇的混合液中，在室温下避光反应24 h，将产品离心分离并用超纯水洗涤五次，之后将产物分散到5 mL超纯水中备用；取1 mL PDANS稀释到5mL超纯水中，在搅拌的条件下依次加入500~700 mg柠檬酸三钠、20 mL 0.015~0.035 mol/L AgNO₃ 溶液，通入N₂除氧，避光条件下搅拌反应2.5 ~ 4.5 h；反应完成后，将产物离心分离，并用超纯水洗涤三次，最后产物真空干燥；

（2）GQD的制备

称取2 g 柠檬酸置于100 mL烧杯中，将烧杯置于200℃鼓风干燥箱中，5 min后柠檬酸开始熔解，随后液体的颜色从无色变到浅黄色，30 min之后变成橘黄色，表明GQD的生成，之后用100 mL、8~12 mg/mL的NaOH溶液调节至中性，制得GQD溶液；

（3）巯基化GQD的制备

分别将13.4~17.4 mg巯基乙胺、85.8~105.8 mg EDC加入到20 mL GQD溶液中，室温下振荡反应24 h，将反应后的溶液透析两天，制得巯基化GQD；

（4）PDANS@Ag/GQD的制备

将1~3 mL巯基化GQD溶液与1~3 mL浓度为2 mg/mL PDANS@Ag溶液混合，室温下震荡12 h，离心洗涤，得到PDANS@Ag/GQD；

（5）电化学发光生物传感器的制备

①将直径4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净；

②滴涂6 μL、0.5~1.5 mg/mL的MWCNT/Pd纳米立方体溶液至电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

③依次滴加10 µL 0.5~1.5 μmol/L凝血酶核酸适配体溶液，3 µL质量分数1%的牛血清白蛋白，封闭非特异性结合位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；

④滴加10 µL pDNA-PDANS@Ag/GQD溶液，在37℃下孵化1~3 h，置于4℃冰箱中晾干后用超纯水冲洗电极表面；

⑤将电极浸入1×10^-14~1×10^-11 mol/L一系列不同浓度的凝血酶溶液中，在37℃下孵化40 min，制得了一种基于聚多巴胺纳米微球负载石墨烯量子点的电化学发光生物传感器。