[发明专利]一种从液体深层发酵灵芝中提取灵芝肽的方法

权利要求书

1.一种液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，包括以下步骤：

A:芝深层发酵培养

a、灵芝菌种培养：培养温度为25～26℃，

取灵芝菌种在菌种培养基中培养20～30天；

b、摇床种：保持温度在25～26℃，在30L搅拌罐中装入所述步骤1)中培养有灵芝菌种的菌种培养基，用水稀释，然后置于振荡器上，搅拌3～4天，控制搅拌速度为100～120转/min；

c、一级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤b中稀释搅拌后的培养基负压吸入300L种子罐中，培养2～3天；

d、二级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤c中搅拌后的培养基负压吸入1.5吨的种子罐中，培养2～3天；

e、发酵培养：保持温度在25～26℃，将所述步骤d中培养后的培养基负压吸入7吨的发酵罐中，并加入发酵培养基发酵;

B、将7吨发酵罐中的灵芝发酵原液升温至45~55℃，加入20000u/g的酸性纤维素酶，加入量为发酵罐实际装量的0.0001~0.0004%，搅拌酶解3~4小时，得到灵芝酶解液；

C、将上述灵芝酶解液降至40~45℃，并加入质量浓度为10%的NaOH溶液，调节pH至7.0~9.0，加入发酵罐实际装量的0.006~0.012%的复合蛋白酶，搅拌酶解3~5小时，升温至85~95℃，灭酶活10~30分钟；

D、板框压滤：将所述步骤C酶解灵芝混合液取出，用50～60kg的压力压滤，除去固体物，得到灵芝酶解原液；

E、采用孔径1~8nm的膜过滤步骤D的灵芝酶解原液，收集透过液，向截留液中加水稀释后再过滤，重复4~6次，合并收集的透过液，将所述的透过液进行电渗析至液体电导率小于30μs/㎝^２、活性炭精制、脱炭，得到精制液；

F、将步骤E得到的精制液，蒸发浓缩至固含量为35~55%真空干澡或喷雾干燥得到灵芝肽粉。

2.按照权利要求1所述的液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，其特征在于：按质量百分数计，所述发酵培养基的配方组成为：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、磷酸二氢钾0.01～0.02％、硫酸铵0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量为水。

3.按照权利要求1或2所述的液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，其特征在于：所述得复合蛋白酶的质量组成为：

10万u/g的中性蛋白酶35%

20万u/g的碱性蛋白酶35%

10万u/g胰蛋白酶 10%

10万u/g的木瓜蛋白酶15%

10万u/g的糖肽酶 5%。

4.按照权利要求3所述的液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，其特征在于：所述步骤E中，电渗析的操作条件为：电压75V，进所述透过液流速为1.2吨/小时，浓水流速为1.25吨/小时，电极冷却水流速为1吨/小时。

5.按照权利要求4所述的液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，其特征在于：所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：待灵芝菌丝上无明显芽头和锁状联合现象，且菌丝变细，菌丝原生质凝集，菌丝有自溶现象发生时。

6.按照权利要求4所述的液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，其特征在于：所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：菌丝湿重达到15～20％。

7.按照权利要求4所述的液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，其特征在于：所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：发酵原液的pH值为3.0～3.5。

8.按照权利要求7所述的液体深层发酵灵芝后提取灵芝肽的方法，其特征在于：所述步骤A中菌种培养基的配方组成为：马铃薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氢钾3～4g、七水硫酸镁1.5～2g、维生素B110～20mg、琼脂18～20g、水1000ml。