[发明专利]检测妊娠特异性糖蛋白3的方法、试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药检测领域，具体涉及检测妊娠特异性糖蛋白3的方法、试剂盒及其制备方法。

背景技术

妊娠特异性糖蛋白(Pregnancy Specific Glycoprotein,PSG)是一种胎盘多肽，自1971年德国科学家Bohn从人胎盘中分离提纯以来，各国学者对其进行了广泛的研究。发现PSG与早孕并发症、宫内胎儿生长状况及消化道肿瘤疾病关系密切，对临床上相关疾病的诊断具有指示作用。日本学者报道妊娠特异性糖蛋白 1(Pregnancy Specific Glycoprotein 1，PSG1)可在子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、乳腺癌、淋巴瘤和和胃肠道恶性肿瘤患者的血中测出，进一步研究证实癌细胞浆中存在有PSG1的患者比没有PSG1患者存活时间短。近年来对妊娠特异性糖蛋白3(Pregnancy Specific Glycoprotein 3，PSG3)的研究受到广泛关注。PSG3是癌胚抗原(CEA)家族的成员，PSG3蛋白全长428个氨基酸，在胚胎发育的过程中同胚胎期免疫耐受的建立以及血管生成有关，同时该指标可应用于消化道肿瘤的诊断。

目前，市场上尚未有检测PSG3相关的试剂盒，使用传统方法进行检测缺乏重复性、准确性，且纯手工加样等系列操作效率低，容易导致实验结果误差大，还易受外部干扰因素影响，不能形成产业化。

发明内容

本发明的目的是解决上述现有技术中的不足，提供检测妊娠特异性糖蛋白3 的方法、试剂盒及其制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

用于检测妊娠特异性糖蛋白3的试剂盒，所述试剂盒包括组分A和组分B，其中组分A为标记有示踪标记物或结合于固相载体上的第一抗妊娠特异性糖蛋白3抗体，组分B为结合于固相载体上或标记有示踪标记物的第二抗妊娠特异性糖蛋白3抗体或妊娠特异性糖蛋白3；并且，组分A和组分B中的任意一种标记有示踪标记物，另一种则结合于固相载体上；所述第一抗妊娠特异性糖蛋白 3抗体和第二抗妊娠特异性糖蛋白3抗体与妊娠特异性糖蛋白3的结合位点不同。

本发明所述的试剂盒，所述示踪标记物为金刚烷、鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯、碱性磷酸酶、稀土元素和辣根过氧化物酶中的至少一种。

本发明所述的试剂盒，所述固相载体为塑料制品、微颗粒或膜载体。

本发明所述的试剂盒，所述固相载体为聚苯乙烯、聚氯乙烯、磁珠、乳胶微球或硝酸纤维膜。

本发明所述的试剂盒，所述标记有示踪标记物或结合于固相载体上的方式可以为直接或间接。

本发明所述的试剂盒，所述间接方式包括通过异硫氰酸荧光素与抗异硫氰酸荧光素抗体体系或通过链霉亲和素与生物素体系进行。

本发明所述的试剂盒，所述试剂盒还包括妊娠特异性糖蛋白3的低点校准品和高点校准品。

用于制备所述试剂盒的方法，所述方法包括：将第一抗妊娠特异性糖蛋白3 抗体和第二抗妊娠特异性糖蛋白3抗体中的任意一种直接或间接标记示踪标记物，将另一种直接或间接结合于固相载体上。

检测妊娠特异性糖蛋白3的方法，所述方法包括使用如权利要求8所述的试剂盒，通过免疫学原理检测待测样品中的妊娠特异性糖蛋白3浓度。

本发明所述的方法，其特征在于，所述检测妊娠特异性糖蛋白3的方法为酶联免疫法，其步骤包括：将所述试剂盒的组分A和组分B与待测样品混合，温育，经分离，向沉淀物中加入底物，检测光信号强度；以同样方法测定妊娠特异性糖蛋白3的低点校准品和高点校准品的光信号强度，并获得妊娠特异性糖蛋白 3的浓度与光信号强度之间的标准曲线；将检测得到的待测样品的光信号强度与标准曲线对照，获得待测样品中的妊娠特异性糖蛋白3浓度。

本发明所述的方法，所述检测妊娠特异性糖蛋白3的方法为化学发光免疫法，其步骤包括：将所述试剂盒的组分A和组分B与待测样品混合，温育，经分离，向沉淀物中加入发光底物，检测光信号强度；以同样方法测定妊娠特异性糖蛋白 3的低点校准品和高点校准品的光信号强度，并获得妊娠特异性糖蛋白3的浓度与光信号强度之间的标准曲线；将检测得到的待测样品的光信号强度与标准曲线对照，获得待测样品中的妊娠特异性糖蛋白3浓度。