[发明专利]一种鸡腺病毒4型高免卵黄抗体的制备方法

权利要求书

1.一种鸡腺病毒4型高免卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、分离毒株制备疫苗：样品经过研磨，冻融3次，12000g/min告诉离心8min，吸取上清液，将上清液接种到鸡胚尿囊腔，经过3代的传递，根据鸡胚的病变和PCR检测情况，验证得到弱毒株XH03；

步骤2、免疫健康鸡群制得蛋：采用自备的鸡腺病毒灭活苗对健康21只进行免疫，免疫两次，间隔两周，一周后开始收集蛋，清理、消毒、晾干备用；

步骤3、将收集好的鸡蛋表面污物洗干净，在0.4％的新洁尔灭溶液中浸泡15min；取出后用消毒纱布擦干，从小头打破蛋壳后倒尽蛋清；用不带针头的1ml无菌注射器插入蛋黄中，吸取500ul放入高压灭菌过的2ml离心管内，加入1ml PBS缓冲液，即卵黄：PBS以1:2的比例稀释；在卵黄液中加入青、链霉素各1000单位/ml；按0.01％加入硫柳汞，以防止微生物污染；在漩涡混匀器上充分混合均匀，并用封口膜封口，放置4℃备用；

步骤4、高免卵黄抗体的提取

1)用PBS稀释卵黄液，体积比为2:1，用PEG-6000配成3.5％的PEG溶液，混合均匀，静置20min，4℃，14000rpm离心10min；

2)弃去上清液和脂肪层；添加PEG-6000，配成12％的PEG溶液，混合均匀，静置20min；4℃，14000rpm离心10min；

3)弃去上清液，用PBS稀释沉淀至原卵黄液体积；然后添加PEG-6000，配成12％(w/v)的PEG溶液，混合均匀，静置20min；4℃，14000rpm离心10min；

4)弃去上清液，PEG用抽气法移走，然后用PBS溶解沉淀至体积为原卵黄溶液的二分之一。