[发明专利]PD-L1、CDK5和CTLA4中的至少一种在制备肿瘤诊断试剂盒中的用途

说明书

本发明提供了一种肿瘤诊断试剂盒，所述肿瘤诊断试剂盒包括检测PD‑L1基因表达产物、CDK5基因表达产物和CTLA4基因表达产物中的至少一种的试剂。本发明提供了一种能够利用体液等生物样本进行肿瘤的检测，稳定性高、定量精确的试剂盒，并由于其无创，易于检测，便于反复多次取样，有助于实时反映动态检测癌患者的疾病状态，有助于临床医生迅速掌握患者病情，从而及时制定更具有个体化的治疗措施。

技术领域

本发明涉及PD-L1、CDK5和CTLA4的用途，具体涉及PD-L1、CDK5和CTLA4中的至少一种在制备肿瘤诊断试剂盒中的用途。

背景技术

癌症是人类头号杀手，以往癌症予人感觉为不治之症，但随着医学的发展，通过手术、放射治疗、化疗及标靶药物治疗等均能有效延长病人寿命。不过，以上治疗方法始终各有限制，成效有限，且伴随着不同的副作用。为使癌症病人在对抗癌魔之余，亦不至元气大伤，医学界开始积极研究对抗肿瘤的新方法，终于有了新进展。针对PD-1/PD-L1和CTLA4的免疫疗法是当前全世界备受瞩目、广为研究的新一类抗癌免疫疗法，让普通患者战胜癌症不再遥不可及。

程序性死亡分子1及其配体(programmed death-1，简称PD-1)是T细胞上的一种跨膜受体，最早是在凋亡的T细胞杂交瘤中利用消减法得到的。因其参与T细胞凋亡，故被命名PD-1。在肿瘤患者体内，PD-L1的高表达能够增强肿瘤的转移能力、导致患者死亡率上升，因此可以作为患者愈后的标志。

PD-1/PD-L1免疫疗法，是除手术、放射治疗、化疗和标靶治疗常用癌症治疗方案之外的新一代疗法，是针对癌细胞懂得逃逸免疫系统攻击以及不会自我凋亡的特性，利用人体自身的免疫系统抵御癌症，PD-1抑制剂能够与配体PD-L1、PD-L2相互作用，抑制T细胞增殖。针对PD-1的单克隆抗体能够阻断PD-1与配体的结合，而抗PD-L1的单克隆抗体可阻断PD-L1与PD-1、CD80的相互作用，从而恢复T细胞功能。重启T细胞免疫系统重新识别肿瘤，继而展开攻击。除PD-1/PD-L1之外，CTLA4也是重要的免疫检查点。此外研究发现CDK5能够调节PD-L1等免疫检查点。

目前针对PD-1/PD-L1和CTLA4等免疫检查点的免疫疗法是通过阻断PD-1/PD-L-1和CTLA4信号通路，激活肿瘤特异性淋巴细胞来杀灭肿瘤细胞，具有治疗多种类型肿瘤的潜力，有望实质性改善患者的总生存期。

鉴于肿瘤的异质性，需要筛选合适的肿瘤病人进行针对PD-L1等免疫检查点的相应的免疫疗法。目前主要是检测PD-1/PD-L1和CTLA4的表达水平。所应用的标本是肿瘤病人的组织标本。但是组织标本在临床应用中有较大的局限性，不能多次和动态的获得标本，不能有效地用来指导临床用药。

液体活检技术可以解决这一问题。其中一个技术是外泌体的检测。外泌体是由细胞内多泡体与细胞膜融合后,释放到细胞外基质中的一种直径约30～120nm的膜性囊泡。T细胞、B细胞、血小板、树突细胞、肥大细胞等血细胞及上皮细胞、肿瘤细胞等其他非血源性细胞都会分泌外泌体，被分泌出的外泌体会进入血液、唾液、尿液、及乳汁等体液中，通过循环系统到达其他细胞与组织，产生远程调控作用。这种普遍存在于机体内的被膜结构参与细胞间的物质交换和信息交流，影响细胞的生理状态,并与多种疾病的发生与进程密切相关。已有研究表明，肿瘤细胞相对于正常细胞会制造更多的外泌体，且外泌体能够影响临近的肿瘤细胞或远处的正常细胞，促进肿瘤的发生发展，以及远处转移。利用外泌体检测以及监控肿瘤有望成为一种有效临床手段，来早期发现癌症，指导治疗方案，进行精准化个体化治疗，目前已有大量文献支持并验证这一观点。而且，相较于最近较为热门的循环肿瘤细胞，由于其来源更丰富且更利于分离，外泌体将更适用于未来的液体诊断。

目前针对PD-1/PD-L1和CTLA4的检测仍以肿瘤组织或手术组织活检，往往需要采用穿刺或者外科手术的方法从患者上获取肿瘤组织的检材。不但不方便，效率低而且会对患者造成人体伤害，往往会延误治疗的最佳时期。

现有技术的缺点：