[发明专利]完整剥离脊髓及神经节的方法

说明书

本发明涉及一种完整剥离脊髓及神经节的方法，包括以下步骤：分离出动物尸体的脊柱和肋骨；及去除脊柱背侧面的各椎骨的背侧份，并去除脊柱腹侧面的肌组织、肌腱以及头端至骶曲部分的椎骨和椎间盘，然后将尾部的脊椎骨沿纵向切开，去除残余椎骨，分离出脊神经节，尾部的脊椎骨为沿脊柱的延伸方向上从骶曲至尾端的脊椎骨。使用本发明的方法，能够完整的剥离脊髓、脊髓神经节和其他外周神经，在涉及外周神经系统中脊神经节、坐骨神经与中枢神经系统脊髓结构、功能的整体研究中有非常重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种完整剥离脊髓及神经节的方法。

背景技术

目前，常用剥离脊髓的方法为注射器冲击法以及使用钳子剥离脊柱骨以暴露脊髓，现有剥离脊髓的方法仅限于脊髓的阶段性剥离，不能很好保留脊髓与其对应阶段神经节的完整性，更不涉及外周神经的保留。此外，在现有技术涉及的用钳子剥离脊柱骨的过程缺少具体的步骤和方法，技术人员在操作时无章可循，极易造成对脊髓不同程度的损伤，给后续实验造成很多不确定因素，导致实验结果的不准确性。目前还未出现关于完整剥离脊髓及神经节的报道。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种完整剥离脊髓及神经节的方法，使用本发明的方法，能够完整的剥离脊髓、脊神经节和其他外周神经，在涉及外周神经系统中脊神经节、坐骨神经与中枢神经系统脊髓结构、功能的整体研究中有非常重要的意义。

本发明提供了一种完整剥离脊髓及神经节的方法，包括以下步骤：

(1)分离出动物尸体的脊柱和肋骨；及

(2)去除脊柱背侧面的各椎骨的背侧份，并去除脊柱腹侧面的肌组织、肌腱以及头端至骶曲部分的椎骨和椎间盘，然后将尾部的脊椎骨沿纵向切开，去除残余椎骨，分离出脊神经节，尾部的脊椎骨为沿脊柱的延伸方向上从骶曲至尾端的脊椎骨。

进一步地，在步骤(1)中，分离之前先对动物灌流，并去除其头部、皮毛、内脏。

进一步地，使用磷酸盐缓冲液(PBS)和多聚甲醛溶液(PFA)进行灌流。

进一步地，多聚甲醛溶液的浓度为4％。

进一步地，动物为小鼠。

进一步地，在步骤(1)中，还包括分离出动物的肋间神经、臂丛神经、胸神经、腰神经等外周神经的步骤。

进一步地，在步骤(2)中，去除脊柱背侧面的各椎骨的背侧份包括：剔除脊柱背侧面的肌组织和筋膜，再将各脊椎骨两侧椎弓板沿纵向切开，然后夹住各椎体的椎弓向背侧弯曲以剥离各所述脊椎骨的背侧份，露出脊髓背侧面。

进一步地，在步骤(2)中，纵行将各脊椎骨两侧椎弓板分别剪开，然后从头端至尾端，夹住各椎体的椎弓向背侧弯曲依次剥离各脊椎骨的背侧份。背侧份包括棘突和椎弓。

进一步地，在步骤(2)中，去除脊柱腹侧面的肌组织、肌腱、椎骨和椎间盘包括：去除脊柱腹侧面的肌组织，除去肌腱，露出腰神经穿出脊椎骨的位置；去除脊柱腹侧面头端至骶曲部分的椎骨和椎间盘，露出腹侧面头端至骶曲部分的脊髓。

进一步地，除去肌腱时，从动物尾端挑出肌腱，按从动物尾端至头端的方向将其撕去，以剥离出坐骨神经，并露出腰神经穿出脊椎骨的位置；该方法可防止在剥离时对腰神经节完整性所造成的破坏。

进一步地，去除脊柱腹侧面的椎骨时，纵行将脊柱腹侧面的各脊椎骨两侧椎弓板分别剪开，然后夹住各椎体的椎弓向背侧弯曲以剥离各脊椎骨的腹侧份。腹侧份包括椎体。

进一步地，在步骤(2)中，将尾部的脊椎骨沿纵向切开包括：从骶曲至尾端，沿脊椎骨正中线纵行向尾端剪开椎骨后，分别向左、右两侧(横向)拉住剪开后的椎骨，使其沿正中线分开，以露出腹侧面骶曲至尾端部分的脊髓。