[发明专利]一种回收片段化降解DNA的方法有效
| 申请号： | 201710086527.4 | 申请日： | 2017-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN106834274B | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 魏冬凯;丁国徽;窦权 | 申请（专利权）人： | 苏州贝斯派生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 32256 南京利丰知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人： | 王锋<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 回收 片段 降解 dna 方法 | ||
1.一种回收片段化降解DNA的方法，其特征在于包括：
(1)取降解DNA溶于水，形成降解DNA溶液，所述降解DNA的溶液中降解DNA的浓度为1μg/30μL～1μg/150μL；
(2)向降解DNA溶液中加入羧基磁珠，混合均匀后，在室温下孵育，使羧基磁珠与大片段DNA充分结合而使小片段DNA保留于溶液中，所述大片段DNA的尺寸大于2000bp，所述小片段DNA的尺寸为200bp～2000bp；
(3)利用磁场作用使羧基磁珠沉降，直至混合液澄清，再分离出羧基磁珠，并收集包含小片段DNA的澄清液；
(4)对羧基磁珠进行清洗；
(5)将羧基磁珠室温干燥后，以洗脱液进行洗脱，并在室温下放置；
(6)利用磁场作用使步骤(5)所获洗脱混合液达到澄清，再将澄清溶液分离出；
(7)将步骤(6)分离出的澄清溶液转移至片段化仪中进行片段化处理，使其中的大片段DNA被打断为小片段DNA；
(8)将步骤(7)所获的含小片段DNA的溶液与步骤(3)所获的包含小片段DNA的澄清液合并；
(9)将步骤(8)最终所获的含小片段DNA的溶液与磷酸盐缓冲液均匀混合后加入离心柱；
向所述离心柱中加入PE缓冲液，清洗离心柱；
将空的离心柱放置入离心机中全速离心2min，并室温晾干；
向离心柱中加入洗脱液，洗脱小片段DNA。
2.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法，其特征在于，步骤(2)包括：将羧基磁珠加入降解DNA的溶液中，混合均匀后在室温下孵育5min-20min，使羧基磁珠与其中的大片段DNA充分结合。
3.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法，其特征在于，步骤(4)包括：以浓度为80v/v％的乙醇溶液对羧基磁珠进行清洗。
4.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法，其特征在于，步骤(5)包括：将羧基磁珠在室温下干燥1min-10min，之后加入洗脱液进行洗脱。
5.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法，其特征在于：所述洗脱液为浓度为3mM-15mM的Tris缓冲盐溶液，其pH值为7.3-8.5。
6.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法，其特征在于：步骤(9)中采用的洗脱温度为20℃-70℃。
7.根据权利要求1所述的回收片段化降解DNA的方法，其特征在于：步骤(9)中采用的洗脱液用量为100μL。
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