[发明专利]快速磁分离蜡样芽孢杆菌的方法

权利要求书

1.蜡样芽孢杆菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：(1)吸取2mL的磁珠，加入到8mL pH＝7.4的灭菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁珠进行洗涤，重复3次，将洗涤好的磁珠重悬于10mL灭菌的PBS溶液；(2)5.8mg EDC，溶于290μL灭菌的PBS中，6.5mg NHSS，溶于325μL灭菌的PBS中，然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁珠中，活化1h；(3)将活化后磁珠用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL灭菌的PBS溶液中；(4)称取牛血清白蛋白24mg，溶解到3mL灭菌的PBS溶液中，然后加入到活化后的磁珠溶液中，反应2h，然后用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于8mL灭菌的PBS溶液中，得到牛血清白蛋白修饰的磁珠；(5)称取200mg万古霉素，169.31mg EDC和47.98mg NHSS，分别溶于灭菌的PBS溶液中，然后混合通过碳化二亚胺法，活化万古霉素表面羧基，活化10min；(6)将活化后的万古霉素加入到牛血清白蛋白修饰的磁珠中，孵育6h；(7)反应完毕后，用灭菌的PBS洗涤3次，重悬于10mL灭菌的PBS溶液中，得到浓度为2mg/mL的万古霉素-牛血清白蛋白-磁珠复合物，用于富集蜡样芽孢杆菌；(8)取10mL待测样品溶液，加入0.7mg万古霉素-牛血清白蛋白-磁珠复合物，置于培养箱上，以200rpm的转速37℃孵育45min；插入磁力架分离3min；(9)磁分离后，无菌PBS溶液清洗后，用无菌的PBS缓冲液混重悬即得富集有蜡样芽孢杆菌的蜡样芽孢杆菌-万古霉素-牛血清白蛋白-磁珠复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述牛血清白蛋白分子其分子量为66000Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述磁珠粒径为180nm，表面修饰羧基的磁珠。