[发明专利]一种抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体细胞株及其在应用，属于兽用生物制品领域，。

背景技术

猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由黄病毒科(flaviviridae)瘟病毒属(pestivirus)的重要成员猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一种高度接触性传染病，是世界动物卫生组织(OIE)规定的必需报告的疫病之一，在我国属一类动物传染病。CSFV为有囊膜的单股正链RNA病毒，病毒粒子直径为25-50nm。与CSFV同属的还有牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)和羊边界病病毒(Border disease virus,BDV),这三种病毒结构相似，血清学上存在交叉反应，并且有相似的宿主范围。猪(包括家猪和野猪)是唯一的易感宿主。CSF根据病程的不同可分为急性、亚急性、慢性和非典型性猪瘟。近些年来，世界范围内CSF流行发生了明显变化：从以前的大规模暴发流行转变为地区性、周期性、散发形式。一些原本宣布消灭CSF的国家又相继出现复发，我国的CSF发病率也呈上升趋势。同时，多种病原混合感染也成为目前十分严重的现象，给临床诊断和防治工作带来了很大的困难。

CSFV的囊膜糖蛋白E2(gp55)是研究得较为清楚的一种结构蛋白。其位于病毒囊膜表面。在CSFV编码的蛋白中，E2是最不保守的一种蛋白，但又是CSFV的主要保护性抗原蛋白，主要参与病毒的感染过程并诱导机体产生中和抗体。其空间构型由三个疏水区和三个N端的链内二硫键构成。E2蛋白由ORF编码的690(Arg)至1060(Leu)之间的370个氨基酸残基组成，在靠近E2蛋白N端上游有一段信号肽序列。利用针对E2蛋白的各种单抗，Wensvoort通过实验已证实CSFV E2具有4个相对独立的抗原结构域，分别为A、B、C和D，其中A、B、C含有中和性抗原表位。后经van Rijn等人的研究，将这4个区域的位置确定下来。按照van Rijn等预测的E2抗原结构模型，这些抗原结构域位于E2蛋白近N端的1/2部分，且处于两个相对独立的抗原结构单位，一个由结构域B和C组成，另一个则由高度保守的A构成，A又可分为A1、A2、A3三个亚结构域，A结构域中含有一疏水区，此疏水区在瘟病毒属中高度保守。A1和A2都很保守，只有A1能产生中和性 抗体；A3与D既不产生中和性抗体，也不保守。CSFV上述抗原结构单位(B/C或A)所诱导的免疫反应都足以保护猪免受强毒攻击，由于E2蛋白是CSFV的免疫优势蛋白，所以人们一直尝试着把E2囊膜糖蛋白作为研制针对CSFV新型疫苗的首选靶蛋白。2000年Lin等报道了CSFV E2抗原表位TAVSPTTLR，该表位位于E2氨基酸序列的829～837位，具有中和活性，在CSFV内高度保守，为CSFV特异的抗原表位，而其他瘟病毒没有这一表位；此外，E2还具有一个所有瘟病毒都有的保守性抗原表位YYEP，位于E2羧基端得995～998位氨基酸。通过对E2蛋白单克隆抗体的进一步筛选，继而进一步获得E2蛋白抗原表位信息，不仅有助于分析E2蛋白的结构，对CSFV的新型诊断技术研发和猪瘟病毒的基础研究也具有积极意义。

发明内容

本发明目的之一是提供一株分泌猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

本发明目的之二是提供一株由上述杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体，该单克隆抗体可与CSFV-E2蛋白发生特异性反应；

本发明的目的之三在于提供含有该株单克隆抗体的抗体检测试剂盒；

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

1.一株抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体细胞株，其特征在于所述细胞株命名为抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞CSFV-1C8株，该细胞株已于2016年12月20日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC No.13387。

2.本发明所述的一株抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体细胞株，其特征在于所述细胞株能稳定地分泌猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体。

3.本发明所述的一株抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体细胞株的应用，其特征在于该CGMCC No.13387细胞株分泌的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体在检测猪瘟病毒抗体检测试剂盒中的应用。