[发明专利]荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

一种荧光定量PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括荧光定量PCR检测部及结果处理评价部，其中结果处理评价部包括位点对应的检测结果处理系统及参考数据库；通过熔解曲线峰型图检测已扩增的位点，得到对应位点的检测结果，对检测结果进行结果处理，将各位点的风险积点统计后得出该待测基因的风险值，并对应数据库中的风险级别，综合得到基因风险及相关处理结果。本发明通过采用荧光定量PCR的多重检测试剂盒，可对多种基因的检测结果进行评估，基于科学准确的结果参考数据库，可以得到十分准确并且个性化及强，可对检测样本给予个性化的结果及建议，已达到更加有效地基因检测的目的，具有更加广泛的使用及推广价值。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及基因检测评估系统，具体的说是一种荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法。

背景技术

随着科学研究的不断发展，人类基因组计划完成后，后基因组计划的全面展开，以基因工程为主导的生物技术在体育运动问题领域的应用得到广泛的关注。目前运用遗传学的理论和方法进行运动选材已经有了初步进展。常用的基因检测方法有：直接测序(directsequencing，DS)、连接酶检测反应(ligase detection reaction，LDR)、限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism，RFLP)、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromotography，DHPLC)、定量PCR，其中利用DNA分析仪直接测序是金标准，但是上述方法分别存在着成本高、准确率低、操作繁琐和重复性差等问题。实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR DetectingSystem，qPCR)，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，荧光定量PCR(realtime PCR)检测在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法，qPCR系统为三代的PCR检测技术，qPCR具有检测灵敏度高，检测线性范围宽，检测精度和重复性好等突出优势，因此被公认为当今世界用于临床的最先进核酸分子诊断技术。因此该技术可以高效、准确的用于运动基因检测。

单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括转换、颠换、缺失和插入，形成的遗传标记，其数量很多，多态性丰富。SNP为第三代遗传标志，人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关，SNP研究是人类基因组计划走向应用的重要步骤。这主要是因为SNP将提供一个强有力的工具，用于高危群体的发现、疾病相关基因的鉴定、药物的设计和测试以及生物学的基础研究等。SNP在基因组中分布相当广泛，研究表明在人类基因组中每300碱基对就出现一次。大量存在的SNP位点，使人们有机会发现与各种疾病，包括肿瘤相关的基因组突变；从实验操作来看，通过SNP发现疾病相关基因突变要比通过家系来得容易；有些SNP并不直接导致疾病基因的表达，但由于它与某些疾病基因相邻，而成为重要的标记。SNP在基础研究中也发挥了巨大的作用，通过对Y染色体SNP的分析，使得在人类进化、人类种群的演化和迁徙领域取得了一系列重要成果。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。

已有越来越多的文献对荧光定量PCR技术从各方面的应用角度进行阐述，大部分文献公开了多种单一片段通过荧光定量PCR技术进行检测的具体方式方法，但在发明人进行荧光定量PCR检测SNP位点的过程中，发现单一片段的检测不足以满足检测要求，对于具有两个或多个SNP位点的综合性检测，需要重复检测，步骤繁琐且操作时间长。