[发明专利]用于单细胞分选与增强IPSC重新编程的细胞培养平台

权利要求书

1.增加人细胞群潜能的方法，包括：将人细胞群与制剂混合物在无饲养层环境中接触以获得具有基态多能性的细胞群，其中所述制剂混合物包含ROCK抑制剂、GSK3抑制剂、TFGβ受体抑制剂和MEK抑制剂；其中(a)接触前，所述人细胞群缺乏基态多能性并包含：成熟状态的诱导性多能干细胞、专能细胞、或非多能细胞；以及(b)所述具有基态多能性的细胞()显示出GATA6, CDX2或CGB中的一个或多个的再激活表达，或()形成具有半球形的形态的集落。

2.如权利要求1所述的方法，其中接触前，所述人细胞群包含非多能细胞，并且其中增加所述人细胞群的潜能还包括将所述人细胞群与至少一种多能性因子接触，所述至少一种多能性因子包含Oct4多肽。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述至少一种多能性因子还包含：Sox多肽；Klf多肽；或者Sox多肽和Klf多肽。

4.如权利要求1所述的方法，其中与未接触制剂混合物所获得的诱导性多能干细胞(iPSC)相比，所述细胞的基态多能性还通过提高的克隆性以及下列的一种或多种来表征：

a) 增加X染色体重新激活；

b) 增加胚胎外干细胞标志物的表达；

c) 提高无饲养层条件下的自我更新能力；

d) 提高无饲养层条件下的单细胞活力；

e) 具有正常的核型和正常的染色体拷贝数；

f) 具有更低至少50%的Xist活性。

5.如权利要求1所述的方法，其中在缺乏TFGβ受体、激活素和MEK信号转导通路的外源性刺激，并且任选地缺乏bFGF通路的外源性刺激的情况下，具有基态多能性的细胞复制并且保持多能性。

6.如权利要求1所述的方法，其中具有基态多能性的细胞允许至少一次细胞分裂。

7.如权利要求1所述的方法，其中具有基态多能性的细胞处于不含细胞因子和生长因子的环境中。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括在无饲养层环境中，存在ROCK抑制剂和以下中的一种或多种的情况下培养具有基态多能性的细胞：(i)TFGβ受体抑制剂，(ii)GSK3抑制剂，和(iii)MEK抑制剂，以允许至少一次细胞分裂同时保持细胞的基态多能性。

9.如权利要求1所述的方法，其中：

(a) ROCK抑制剂为thiazovivin或Y27632；

(b) TFGβ受体抑制剂为A-83-01或SB431542；

(c) GSK3抑制剂为CHIR99021或BIO；

(d) MEK抑制剂为PD98059或PD032901；或者

(e) TFGβ受体抑制剂为SB431542，GSK3抑制剂为CHIR99021， MEK抑制剂为PD0325901，以及Rock抑制剂为thiazovivin。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述非多能细胞是重新编程的细胞或体细胞。

11.获得具有基因组稳定性的多能细胞的方法，其包括：

(a) 在足以获得具有基因组稳定性的多能细胞的条件下，在包含制剂混合物的细胞培养基中培养人体细胞或人iPSC，所述制剂混合物包含ROCK抑制剂、GSK3抑制剂、TFGβ受体抑制剂和MEK抑制剂，其中所述细胞培养基是无饲养层的；以及

(b) 获得多能细胞，

其中所述多能细胞具有基态多能性，其中所述多能细胞在酶促单细胞解离后活力提高，并且其中所述具有基态多能性的多能细胞()显示出GATA6, CDX2或CGB中的一个或多个的再激活表达，或()形成具有半球形的形态的集落。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述条件包括将人的体细胞与至少一种多能性因子接触，其中所述至少一种多能性因子包含Oct4多肽。