[发明专利]一种降低半静态养殖水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率的方法

说明书

本发明公开了一种降低半静态养殖水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率的方法，本发明针对半静态水中斑马鱼对毒死蜱的暴露，检测、调控水中毒死蜱的浓度，通过添加EGCG试剂，调整EGCG与水中毒死蜱的浓度比，达到降低斑马鱼的死亡率。发明方法通过原位或异位技术实施，简单易行，可提高斑马鱼暴露于毒死蜱的存活率，避免使用化学解毒剂带来的后续副作用，提高养殖的经济效益；同时避免排放废水中化学解毒剂的二次污染，提高环境经济效益。

技术领域

本发明涉及水产品养殖技术领域，尤其涉及一种降低半静态养殖水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率的方法。

背景技术

高毒有机磷农药的替代品种毒死蜱被广泛用于农业生产和草坪杀虫剂，已造成环境水体污染。毒死蜱对人类属于中低毒农药，但是鱼类的敏感类农药。毒死蜱属于神经毒剂，其功能之一是抑制机体内神经中乙酰胆碱酯酶AChE或胆碱酯酶ChE的活性，破坏正常的神经冲动传导，引起斑马鱼中毒死亡。另外，机体在正常情况下，体内氧自由基处于动态平衡状态。 一旦氧自由基在机体内失去平衡，如超过了细胞抗氧化防护的能力，则会造成氧胁迫。研究表明，达到半致死浓度的毒死蜱会破坏机体氧自由基平衡，形成氧化胁迫，造成机体损伤、死亡。

对于斑马鱼，如果血清中毒死蜱浓度升高，酶活性将会降低，解毒功能下降。鱼类有机磷农药中毒，多用“阿托品”洒入养殖水中进行解毒，降低致死率。但是“阿托品”易于鱼体内聚集，具有明显的生理副作用。同时如果滞留在养殖废水中，扩散到其他环境介质，易造成环境危害。表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是一种来源于植物的多酚化合物，具有抗氧化、抗癌、抗突变等生理活性，这些功效归结于他们对氧自由基的清除能力。研究表明EGCG具有与肠、肝、和肺中的其他酶共同阻止某些有害物质的活力，保护机体。最新研究证明EGCG可能具有神经保护功能。到目前为止， EGCG仍然被认为是具有环境友好性的纯天然试剂。

斑马鱼是生态和环境指示性生物，在生态、环境和毒理等方面极具研究价值，同时又具有观赏性等其他用途，其养殖通常在小体积半静态水中进行。

发明内容

本发明提供了一种降低半静态养殖水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率的方法，采用EGCG降低水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率 。本发明针对半静态水中斑马鱼对毒死蜱的暴露，检测、调控水中毒死蜱的浓度，通过添加EGCG，调整半静态水中EGCG与毒死蜱浓度比 ，来降低斑马鱼的死亡率。发明方法简单易行，可提高斑马鱼暴露于毒死蜱的存活率，避免使用化学解毒剂带来的后续副作用，提高养殖的经济效益；同时避免排放废水中化学解毒剂的二次污染，提高环境经济效益。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种降低半静态养殖水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率的方法，其特征在于： 在含有毒死蜱的半静态养殖水中添加适量的EGCG ，使得养殖水中EGCG与毒死蜱的浓度比=（1-2）：1，所述的毒死蜱在水中的浓度为0.48-0.70 mg/L 。

所述的一种降低半静态养殖水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率的方法，其特征在于，具体操作步骤如下：

（1）取适量养殖水，测量水中毒死蜱母体起始浓度、pH值、水温，调整养殖水的pH=6.8~8.5，控制水温为18～25℃；

（2）根据步骤（1）测量得到的水中毒死蜱母体起始浓度，然后按比例加水稀释至毒死蜱的浓度为0.48-0.70mg/L， 在按比例向养殖水中加入已预先配制好的高浓度EGCG水溶液，使水中EGCG与毒死蜱的浓度比=（1-2）：1， 其中，最佳配比为 EGCG：毒死蜱=（0.5-1.0）：0.5，（mg/L：mg/L），即可有效控制斑马鱼死亡，达到降低半静态养殖水中毒死蜱诱导斑马鱼死亡率的目的。

所述高浓度EGCG溶液是指由纯度≥90%的EGCG粉状固体配制成浓度≥5.0g/L的EGCG溶液。

本发明涉及利用纯植物提取剂EGCG的配比和使用方法，降低水中斑马鱼对毒死蜱的暴露死亡率。相关研究实验如下：