[发明专利]一种采用偏振光显微镜观察胶原纤维的染色方法

说明书

本发明提供了一种采用偏振光显微镜观察胶原纤维的染色方法。该方法是先用在70℃～90℃的饱和苦味酸‑天狼星红染液进行染色，然后用浓度为1～10%w/v的弱酸溶液浸洗组织切片，最后按常规对组织切片进行浸洗，烘干，固定；加热后的苦味酸对组织的渗透作用加强，使得衬染背景更加鲜艳，加热后的天狼星红染液对胶原纤维的吸附也更牢，着色清晰；弱酸溶液可以洗掉组织切片内析出的苦味酸结晶，且不容易洗掉黄色衬染背景，从而保证胶原纤维着色佳，黄色衬染背景明显，胶原纤维清晰；利用本发明所述染色方法重复性好，胶原纤维着色明显，纤维结构清晰，该方法有利于对不同类型的胶原纤维进行定位和定量分析，便于判断组织纤维化程度。

技术领域

本发明涉及组织染色处理技术领域，更具体地，涉及一种采用偏振光显微镜观察胶原纤维的染色方法。

背景技术

胶原纤维广泛分布于各个脏器内，是含量最多的一种纤维，现有技术中已知的胶原纤维有四种类型（I、II、III、IV），这四种类型的胶原纤维对于研究病变的发生机理和演变有一定的意义，虽然免疫组织化学染色和分子病理学技术发展迅速，但特殊染色方法在病理学诊断中的应用仍无法替代；目前常用的胶原纤维特殊染色方法包括Masson染色、VanGieson染色、HE染色、苦味酸-天狼星红染色方法等，在光镜下，用Masson染色、Van Gieson染色不能分辨不同类型的胶原纤维，难以在组织切片上完成对各型胶原纤维的分布、结构及含量的观察和检测；且这类染色的步骤繁琐，不易操作；应用苦味酸-天狼星红染色方法并结合偏光显微镜观察胶原纤维，可提高分辨率；结合图像分析技术，可以对不同类型的胶原纤维进行定位和定量分析，即可分析胶原纤维的类型、分布、排列及含量，便于判断组织纤维化的程度，这种方法较普通光镜观察具有不可比拟的优势。

现有技术中利用常规的苦味酸-天狼星红染色，在偏振光镜下，胶原纤维着色较弱，效果不佳，且切片染色后常用乙醇脱水，容易使得黄色衬染背景减弱，导致胶原纤维结构不清晰，影响观察这对组织的正确观察和病变分析。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种偏振光显微镜观察胶原纤维的染色方法。

本发明的第二个目的是提供上述方法在以非疾病诊断目的的判断组织纤维化程度中的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

一种采用偏振光显微镜观察胶原纤维的染色方法，包括以下步骤：

S1. 苦味酸-天狼星红染色：将70℃～90℃下的饱和苦味酸-天狼星红染液滴加入经脱蜡至水处理过的组织切片上进行染色；

S2. 酸洗：用浓度为1～10%w/v的弱酸溶液浸洗组织切片；

S3. 水浸洗，烘干，固定即可。

S1中70℃～90℃下的饱和苦味酸-天狼星红染液是指70～90℃下在苦味酸-天狼星红水溶液中，苦味酸的溶解度达最大且不再发生改变。

室温下饱和的苦味酸溶液的制备：2.46g苦味酸溶于200mL蒸馏水中，加热助溶，冷却至室温后，溶液底部有结晶析出，取上层清液备用，即得室温下饱和的苦味酸溶液。

本发明所述70℃～90℃下饱和苦味酸-天狼星红染液的制备：取0.1g苦味酸加入至1mL天狼星红染液中，70℃～90℃水浴后，染液底部有不溶粉末，取上层溶液备用，即得70℃～90℃下饱和苦味酸-天狼星红染液。

现有技术已知：苦味酸的溶解度随着温度的升高而不断增加，苦味酸在不同温度的水中溶解度数据见表1。