[发明专利]一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法

说明书

本发明公开了一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法，属于水产养殖疾病防控技术领域。本发明的技术方案要点为：一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法，从养殖环境中分离出嗜水气单胞菌，并检测其毒力基因表达情况，通过细菌攻毒和免疫保护率动物实验，筛选出用于活菌疫苗的嗜水气单胞菌。本发明通过所列的系列引物，检测嗜水气单胞菌的毒力与毒力相关基因，筛选具有广阔应用前景的活菌疫苗，可以较好的保护养殖鱼类抵抗嗜水气单胞菌的感染。应用此种方法制备的疫苗，比灭活疫苗和减毒疫苗制备程序更简单，免疫保护效果更优，并且所分离的细菌为养殖环境中的天然细菌，不用担心复壮、返祖的风险，具有更高的安全性。

技术领域

本发明属于水产养殖疾病防控技术领域，具体涉及一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法。

背景技术

嗜水气单胞菌在河流、湖泊、池塘、食物、动物及人体等自然环境中广泛存在。嗜水气单胞菌属于条件性致病菌，可引起多种水生动物和陆生动物患病，是一种典型的人-畜-鱼共患病病原菌，当环境条件恶劣，机体抵抗力下降可导致鱼类、两栖类、爬行类等冷血动物和哺乳动物发病，引发水生动物细菌性出血病、体表溃疡症以及哺乳动物腹泻等，是鱼类、爬行类和人类的一种致命传染源。

目前，水产养殖中用于治疗细菌感染性疾病的药物主要为抗菌药物，但抗菌药物的滥用导致水环境污染、药物残留和细菌耐药性产生的问题，特别是多重耐药菌迅速增加，使其不能有效控制感染，成为细菌性疾病治疗的难题，也加重了水产养殖的成本。细菌疫苗从机体免疫出发，能提高水产动物对病原菌的抵抗力，降低病原菌感染的发生率，有利于感染性疾病的控制。所以，开发相关细菌疫苗一直是水产养殖领域的研究热点。

根据制备方式的不同，细菌疫苗可分为灭活疫苗和活菌疫苗。灭活疫苗是用免疫原性强的病原微生物制成的疫苗；活菌疫苗是用弱毒、但免疫原性强的病原微生物，经繁殖后制成的疫苗，也称减毒活疫苗。与灭活疫苗相比，活菌疫苗在免疫保护方面具有较大的优势，如(1)接种途径多样化，不仅可以注射，还可口服、浸泡等；(2)接种数量少，对动物品质影响较小；(3)产生免疫保护的时间短，一般一周内即可产生免疫保护力，而灭活疫苗需要二周以上；(4)免疫效果强且持久，一般只需要接种一次。然而，活菌疫苗有可能出现毒力返强的现象，使其具有一定的风险性。因此解决活菌疫苗毒力问题，是水产动物活菌疫苗发展至关重要的一步。本发明通过检测养殖水环境中的嗜水气单胞菌，选择特定基因型的无毒菌株，进一步通过动物实验证实其免疫保护率，发现免疫原性高的基因型特征，对嗜水气单胞菌活菌疫苗的研制具有重要的指导意义。

发明内容

本发明的目的是提供了一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法，从鱼体及养殖水环境中筛选无毒、免疫原性高的嗜水气单胞菌菌株，用于活菌疫苗的制备，可达到高效、经济和安全的目的。

本发明为实现上述目的采用如下技术方案，一种嗜水气单胞菌活菌疫苗菌株的筛选方法，其特征在于：从养殖环境中分离出嗜水气单胞菌，并检测其毒力基因表达情况，通过细菌攻毒和免疫保护率动物实验，筛选出用于活菌疫苗的嗜水气单胞菌。