[发明专利]一种胶原‑羟基磷灰石人工骨的制备方法

权利要求书

1.一种胶原-羟基磷灰石人工骨的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

（1）将聚乳酸用溶剂配制成1~3wt%的溶液；

（2）制备壳聚糖，并将制得的壳聚糖用稀醋酸配制成0.02~0.05wt%的溶液；

（3）用蒸馏水分别配制浓度为8~12g/L的胶原蛋白溶液和浓度为1~5g/L的角蛋白溶液；

（4）将羟基磷灰石加入到8~12g/L的胶原蛋白和1~5g/L的角蛋白的混合溶液中，用氢氧化钠溶液调节pH至7.0，并加入1.5wt%的京尼平水溶液在4℃交联2小时得混合溶液A，冷冻干燥制得胶原蛋白、角蛋白和羟基磷灰石质量比为0.4~0.6:0.15~0.25:1的胶原蛋白/角蛋白/羟基磷灰石复合粉末，京尼平水溶液占混合溶液A总质量的1~1.5wt%；

（5）将步骤（4）制得的胶原蛋白/角蛋白/羟基磷灰石复合粉末按照质量比为1:10的比例分散到步骤（2）配制的壳聚糖溶液中，用氢氧化钠溶液调节pH至7.0，随后加入8~12g/L的胶原蛋白溶液和1~5g/L的角蛋白溶液，并加入1.5wt%的京尼平水溶液在4℃交联12小时得混合溶液B；所述胶原蛋白溶液占混合溶液B总质量的15~20wt%，所述角蛋白溶液占混合溶液B的6~10wt%，京尼平水溶液占混合溶液B总质量的0.5~1wt%；

（6）将步骤（5）得到的混合溶液B冷冻干燥成复合粉末后，将所得复合粉末B与纳米纤维素加入到步骤（1）配制的聚乳酸溶液中，搅拌共混后经冷冻干燥、研磨后制得所述胶原-羟基磷灰石人工骨；所述复合粉末B、纳米纤维素和聚乳酸溶液的质量比为7~9:0.5~1:3~5。

2.根据权利要求1所述的胶原-羟基磷灰石人工骨的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述溶剂为四氢呋喃。

3.根据权利要求1所述的胶原-羟基磷灰石人工骨的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述壳聚糖的制备方法，具体包括以下步骤：

（1）原料处理：取橡胶木犀金龟成虫，用水洗干净后进行冷冻干燥，粉碎并过25目筛得虫粉，备用；

（2）脱除无机盐：将步骤（1）得到的虫粉加入到1mol/L的盐酸溶液中，固液比为1:15， 40℃下搅拌6小时，随后离心分离20min，将所得固体用蒸馏水洗涤至中性；

（3）脱除蛋白质：将步骤（2）所得物料加入到8wt%的氢氧化钠溶液中，固液比为1:10，充分搅拌后，进行微波处理，微波功率为750W，处理时间3min后，冷却至室温浸泡2h，随后离心分离20min，将所得固体用蒸馏水洗涤至中性，得到甲壳素；

（4）脱色：将步骤（3）所得甲壳素加入高锰酸钾进行脱色处理，随后将脱色后的固体用蒸馏水洗涤至中性；

（5）脱乙酰基：将步骤（4）所得物料加入到28wt%的氢氧化钠溶液中，固液比为1:18，充分搅拌后，进行微波处理，微波功率为1350W，处理时间5min后取出，随后离心分离15~20min，将所得固体用蒸馏水洗涤至中性；随后将所得物料分散到50mM Tris-HCl的缓冲液中，固液比为1:50，调节溶液pH为7.5，随后再加入占溶液总质量0.2wt%的甲壳素脱乙酰酶，在温度50℃下反应8h，随后离心分离20min，将所得固体用蒸馏水洗涤至中性，冷冻干燥制得壳聚糖。