[发明专利]一种筛选p53与MDM2蛋白相互作用的抑制剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种p53与MDM2蛋白相互作用的抑制剂筛选方法。该方法可免标记、在线研究p53与MDM2蛋白的相互作用并筛选抑制剂。

背景技术

癌症抑制转录因子p53被称为“基因组卫士”，它能调控细胞增殖、DNA修复以及细胞衰老和凋亡。负向调节剂MDM2蛋白能结合p53蛋白的N端区域，阻碍p53的转录活性。通过筛选特定抑制剂来抑制p53与MDM2蛋白的相互作用，可恢复p53的稳定性及转录活性功能。因此，开发筛选二者相互作用抑制剂的方法无疑成为癌症研究的热点；本方法首先将一致性双链DNA修饰到芯片表面，一致性双链DNA随后捕获p53蛋白。当抑制剂与MDM2蛋白共存时，由于抑制剂与p53蛋白质竞争性地结合MDM2的憎水区域，在芯片表面被p53蛋白所捕获的MDM2蛋白的量会大幅度降低，表面等离子体激元共振信号随之变化，从而实现抑制剂的在线筛选。

发明内容

本技术发明了一种p53-MDM2蛋白相互作用的抑制剂筛选方法，相比于现有技术，有如下优点：该方法具有免标记、步骤简单、灵敏度高、重现性好等优点，能够实现抑制剂的快速、实时、连续在线筛选。在癌症治疗药物的开发方面，具有良好的应用前景。具体实施步骤参照如下实例：在芯片表面先后流动注射巯基十一烷酸、2.0μM氨基化的DNA、靶点DNA，在线组装形成一致性双链DNA。随后流动注射4.5nM的p53蛋白质；将抑制剂与25nM的MDM2蛋白在25℃下孵育2h后,流动注射到上述芯片表面，通过检测表面等离子体激元共振信号的变化，来筛选抑制剂并衡量其抑制效果。