[发明专利]脂蛋白相关磷脂酶Lp-PLA2活性及总量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种脂蛋白相关磷脂酶Lp-PLA₂活性及总量检测试剂盒，其特征在于，包括有固相载体、缓冲液、酶分解底物、酶标抗体试剂、洗涤液、显色底物、终止液、酶活性校准品和酶免校准品，其中：

所述固相载体包被有抗-Lp-PLA₂特异N端非抑制性抗体；

所述酶分解底物为血小板活化因子或其氧化修饰的磷脂酰胆碱；

所述酶标抗体试剂为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶的抗-Lp-PLA₂抑制性抗体；

所述酶活性校准品包括含有多种浓度的对硝基酚标准品；

所述酶免校准品包括含有Lp-PLA₂抗原的多个参考校准品；

所述显色底物包含0.015-0.02％的过氧化物的显色底物A液和包含0.25-0.32g/L的TMB的显色底物B液。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体采用含有以下组分的包被液包被所述抗-Lp-PLA₂特异N端非抑制性抗体：

Na₂CO₃：1.59g/L；

NaHCO₃：2.93g/L；

和/或者，所述固相载体采用含有以下组分的封闭液封闭所述抗-Lp-PLA₂特异N端非抑制性抗体：

BSA：10.0g/L；

蔗糖：52.0g/L；

酪蛋白：5.0g/L；

NBS：100ml/L；

明胶：5.0ml/L；

50mM TB 8.0：50ml/L；

Proclin300：1.0ml/L。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体采用含有以下组分的缓冲液缓冲所述抗-Lp-PLA₂特异N端非抑制性抗体：

Hepes：4.8g/L

NaCl：8.8g/L

EDTA：1.5g/L；

所述酶分解底物溶液包括有以下组分：

血小板活化因子或其氧化修饰的磷脂酰胆碱：1～3mmol/L；

Citric acid monohydrate：4.2g/L；

Ethanol：100ml/L。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体试剂采用含有以下组分的稀释液：

BSA：10.0g/L；

蔗糖：52.0g/L；

酪蛋白：5.0g/L；

NBS：100ml/L；

明胶：5.0ml/L；

50mM TB 8.0：50ml/L；

Proclin300：1.0ml/L。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品包括有Lp-PLA₂抗原含量分别为1000ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、100ng/ml、50ng/ml和0ng/ml的至少一种校准品；且所述校准品采用含有以下组分的校准品稀释液：

Na₂HPO₄·12H₂O：53.7g/L；

NaH₂PO₄·2H₂O：7.8g/L；

NBS：200ml/L；

甘油：50ml/L；

Tween-20：1ml/L；

Proclin300：1ml/L。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述显色底物A液包括以下组分：

三水合乙酸钠：27.2g/L；

柠檬酸：3.2g/L；

30％H₂O₂：0.6ml/L；

和/或者，所述显色底物B液包括以下组分：

乙二胺四乙酸二钠0.4g/L；

柠檬酸；1.9g/L；

甘油；100ml/L；

TMB；0.3g/L；

DMSO：6ml。