[发明专利]一种侧孢芽孢杆菌微生物肥料及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种侧孢芽孢杆菌微生物肥料的制备方法，所述方法包括如下步骤：

S1：侧孢芽孢杆菌菌株活化，无菌水冲洗，得到种子液；

S2：使用第一培养液对种子液进行扩增培养，得到第一扩增培养液；

S3：使用第二培养液对第一扩增培养液进行培养，得到第二扩增培养液；

S4：第二扩增培养液进行液体发酵培养，得到发酵液；

S5：将发酵液淋入固体培养基中进行固体发酵，并进行后处理，得到侧孢芽孢杆菌发酵菌剂；

S6：将侧孢芽孢杆菌发酵菌剂与有机质混合物进行堆肥发酵处理，从而得到所述侧孢芽孢杆菌微生物肥料。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S1具体如下：

S1-1：选择侧孢芽孢杆菌菌株，并在无菌条件下接种于斜面培养基上进行活化培养，得到活化菌株；

S1-2：无菌水清洗斜面，得到所述种子液；

步骤S1-1中，每100g所述斜面培养基的组成为：琼脂5-6g、蛋白胨3-4g、酵母浸膏0.02-0.03g、黄豆粉2-3g、玉米粉0.8-1.4g、牛肉膏3-4g、氯化钠0.2-0.5g、葡萄糖0.06-0.1g，余量为无菌水，并调节pH值为7-7.2。

3.如权利要求1-2任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S2具体如下：

S2-1：配制第一培养液

分别称取如下的物质：金属元素水溶液25ml、维生素E 1.5g、柠檬酸0.15g、L-脯氨酸0.2mg、蔗糖2.5g、琼脂8g、蛋白胨12g、酵母浸膏1.4g、硫酸铵1g、磷酸钠2.5g、牛肉膏3.5g和硝酸钠4g；

将上述物质加入到去离子水中，充分搅拌完全，并用去离子水定容至1000ml，即得到所述第一培养液。

S2-2：按照1:40-50的体积比，将所述种子液接种于所述第一培养液中，在34-36℃下通风振荡培养20-24小时，从而得到所述第一扩增培养液。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤S2-1中，所述金属元素水溶液是将2.5g硫酸锰、3g氯化锌、4g硫酸镁、1.5g氯化钴、2g硝酸铜、3g氯化钙、4g氯化亚铁、3g氯化铁充分溶解于1000ml蒸馏水中而得到的。

5.如权利要求3-4任一项所述的制备方法，其特征在于：步骤S2-2中，所述通风所通入的气体中，氧气体积含量为14-20％，优选为16-18％，最优选为17％。

6.如权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S3具体如下：

S3-1：将第一培养液中的酵母浸膏用量减半，且金属元素水溶液的用量增大一倍，其它均不变，从而得到所述第二培养液；

S3-2：按照1:30-35的体积比，将所述第一扩增培养液接加入到所述第二培养液中，在34-36℃下通入空气振荡培养14-16小时，从而得到所述第二扩增培养液。

7.如权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S4具体如下：

将所述第二扩增培养液加入到为其体积20-30倍的液体发酵培养基中进行两段式升温发酵培养，发酵培养总时间为10-12小时，期间一直通入空气，通入空气的通风比为1:0.6-1，从而得到所述发酵液；

其中，所述液体发酵培养基以每升(L)计，包含酵母浸膏0.5g、蛋白胨2g、麦芽糖4g、葡萄糖1g、硫酸锰0.6g、氯化钠3.8g、黄豆粉7g、硼酸1.5g、硝酸钾2.5g、尿素6g、赖氨酸0.7g和硫酸铵1.5g，余量为无菌水；

其中，所述两段式升温发酵培养是指在发酵培养总时间的前一半时间中，发酵温度为32-34℃，然后在10分钟内将温度升高至38-40℃，并在该温度下完成后续剩余时间的发酵。

8.如权利要求1-7任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S5具体如下：

按照质量比1:10-14的比例，将所述发酵液淋入固体培养基中，再加入适量去离子水，使整体的水分质量含量为32-36％，然后充分翻拌均匀，装入长度为3米、宽度为1.5米和深度为1.5米的发酵槽中，自然堆积发酵60-70小时，期间始终保持整体的水分质量含量为32-36％，并通入无菌风保持发酵槽内部的中心温度为56-60℃；发酵结束后，通热风干燥，直至水分质量含量低于5％，得到发酵菌剂。