[发明专利]成纤维细胞的培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种将诱导性多能干细胞诱导为成纤维细胞的培养基，其特征在于，由基础培养液和添加物组成；所述基础培养液为体积比为1:0.5～2的H-DMEM培养液和F12培养液；以在所述基础培养液中的添加量计，所述添加物由如下组分组成：

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，以在所述基础培养液中的添加量计，所述添加物由如下组分组成：

3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述添加物还包括抗生素。

4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述抗生素包括在所述基础培养液中添加量为0.05～0.2mg/mL的青霉素以及在所述基础培养液中添加量为0.05～0.2mg/mL的链霉素。

5.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述添加物还包括自由基清除剂。

6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述自由基清除剂为在所述基础培养液中添加量为0.05～0.2mmol/L的β-巯基乙醇。

7.权利要求1-6任一项所述的培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

按所述体积比混合H-DMEM培养液和F12培养液，得所述基础培养液；

将所述胰岛素、氢化可的松、转铁蛋白、亚硒酸钠、非必需氨基酸、谷氨酰胺衍生物、成纤维细胞生长因子、雌二醇、黄体酮、8-溴环磷腺苷，人卵泡刺激素添加至所述基础培养液中，即可。

8.权利要求1-6任一项所述的培养基在成纤维细胞培养中的应用。

9.一种将诱导性多能干细胞诱导为成纤维细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用mTeSR1培养基对诱导性多能干细胞进行培养，当汇合度为75～85％时，消化为单细胞；

取适量所述单细胞，以EB拟胚体形成培养基进行培养，形成拟胚体；

将所述拟胚体接种至权利要求1-6任一项所述培养基中培养，即得成纤维细胞。

10.根据权利要求9所述的将诱导性多能干细胞诱导为成纤维细胞的方法，其特征在于，所述拟胚体的培养条件为：采用CO₂浓度为5～7％，温度为37℃的培养箱培养24～50h。