[发明专利]重金属钼离子直接竞争酶联免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种基于直接竞争酶联免疫法钼离子检测试剂盒，包括：包被有羊抗鼠IgG二抗的检测板，所述检测板真空密封包装；所述羊抗鼠IgG二抗的包被浓度为50～200μg/mL；质量浓度为20～50μg/mL的酶标Mo‑ITCBE鳌合物半抗原；质量浓度为10～20μg/mL的抗钼离子单克隆抗体溶液；所述抗钼离子单克隆抗体溶液由Mo‑ITCBE‑cBSA免疫原免疫Balb/C小鼠制备而来；1.0～3.0mol/L的终止液；样品稀释液；底物显色液；洗涤液；钼离子标准品溶液；质量浓度为10～20mg/mL的EDTA处理液。本发明提供试剂盒具有灵敏度高、特异性强的特点，同时具有检测时间短的优点。

技术领域

本发明属于环境检测技术领域，具体涉及重金属钼离子直接竞争酶联免疫检测试剂盒及其应用。

背景技术

钼作为一种过渡态金属元素对生物体具有重要的作用，在生物体固氮过程中具有催化作用，在体内氧化还原反应过程中起着传递电子、催化底物的作用，参与黄嘌呤氧化酶/脱氢酶、醛氧化酶和亚硫酸盐氧化酶的组成，同时具有保持全球碳、硫、氮代谢平衡的功能。在自然状态下钼对生物体没有危害，但由于钼广泛应用于特种钢、机械、石油化工、国防航空、电子电器和核工业等领域，导致钼矿大量开采，六价钼离子以不同形式进入自然界，环境污染急剧加重，加之累积效应和生物富积作用，对环境污染和人类健康构成严重的威胁。

1938年Ferguson首次报道了牧草中钼含量过高导致羊持续腹泻和脱毛等中毒症状。英国的“牛腹泻病”、新西兰的“牛泥炭泻”、澳大利亚的“牛地方性血尿症”和我国1981年赣南地区发生的耕牛“红皮白毛症”等，都是六价钼中毒的典型案例。因此，加强对环境土壤、水源、食品和饲料中六价钼离子含量的检测意义重大。

目前动物性食品及环境水样中M0⁶⁺污染的主要检测方法包括传统的理化检验和免疫学检验两种类型的方法。理化检验包括紫外分光光度法(UV)、电化学分析法、原子吸收光谱法(AAS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)、氢化物发生-原子荧光光谱法(Mo-AFS)和中子活化分析法(NAA)等，它们是目前Mo⁶⁺污染检测的主要方法，灵敏度高，结果准确，但由于需要昂贵的仪器设备、熟练的专业人员、烦琐费时、周期长、费用高、不能现场操作、样品筛检量小等缺陷，其应用受到了限制。免疫学检验方法是以抗原抗体分子的特异性、可逆性反应为基础的分析技术，包括荧光偏振免疫测定法(FPIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、KinExA免疫测定法(KIA)、胶体金免疫层析试验测定法(GICA)和微悬臂梁免疫传感器(MIS)等，由于抗原抗体的结合具有高度的选择性和敏感性，这一技术具有简便、快速、敏感、特异、经济、筛检量大等优势，代表着重金属离子检测的发展方向。目前，国内外重金属钼离子污染免疫检测技术研究非常活跃，其中公告号为CN103412127B的专利公开了一种用于检测六价钼离子的酶联免疫试剂盒及其组建和检测方法，其检测灵敏度为1ng/mL，并且检测时间较长。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于直接竞争酶联免疫法检测钼离子试剂盒及其应用，使所述试剂盒具有检测时间短的优点，同时具有灵敏度高、特异性强的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于直接竞争酶联免疫法钼离子检测试剂盒，包括：

(1)包被有羊抗鼠IgG二抗的检测板，所述检测板真空密封包装；所述羊抗鼠IgG二抗的包被浓度为50～200μg/mL；

(2)质量浓度为20～50μg/mL的酶标Mo-ITCBE鳌合物半抗原溶液；

(3)质量浓度为10～20μg/mL的抗钼离子单克隆抗体溶液；所述抗钼离子单克隆抗体溶液由Mo-ITCBE-cBSA免疫原免疫Balb/C小鼠制备而来；

(4)1.0～3.0mol/L的终止液；