[发明专利]鉴定高含油率油茶的方法

说明书

本发明提供一种鉴定高含油率油茶的方法。本发明首先筛选得到与油茶种子含油率相关的SNP分子标记，该SNP分子标记通过核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑2所示的引物扩增得到，扩增产物含有位于Cofad2‑2基因开放阅读框的778bp处的位点，该位点的多态性为C/A。利用该分子标记对油茶进行检测，若该位点的基因型为C/C，则待鉴定油茶为种子高含油率油茶或候选高含油率油茶；若该位点的基因型为C/A，则待鉴定油茶为低含油率油茶或候选低含油率油茶，本发明方法可在苗期检测油茶种子含油率，大大提高了高油油茶育种的选择效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，属于油茶分子生物学及遗传育种技术领域，具体涉及一种油茶种子含油率筛选的多态性位点分子标记，同时还涉及该分子标记在油茶种子高含油率育种中的应用。

背景技术

油茶(Camellia oleifera Abel.)，隶属山茶科(Theaceae)山茶属(CamelliaL.)，是我国特有的木本油料树种，也是我国南方重要的木本食用油料物种。油茶籽油营养保健价值较高，其品质可与橄榄油相媲美，是一种优质的食用油，其不饱和脂肪酸含量达90％以上，以油酸(80％以上)和亚油酸(约8％)为主，且具有抗肿瘤、降血脂等功效。近十年来，在国家政策引导和扶持下，我国油茶产业得到了长足发展，全国种植面积已达6000多万亩，年产油60多万吨。根据《全国油茶产业发展规划(2009～2020)》，至2020年，我国油茶种植面积将达到9300万亩，因此油茶良种苗木需求量很大。目前，油茶育种以选择和杂交育种为主要手段、以产果量为主要育种目的，并已取得了重要进展，但以提高油茶籽含油率为目的育种研究开展较少。同时，由于油茶童期长的生物特性导致油茶育种年限较长，新品种选育缓慢，良种选育速度还不能满足产业发展的需求，已成为阻碍油茶产业发展的重要因素之一。应用分子标记辅助(MAS)育种手段可从苗期开始选择，大幅缩短育种的进程，对以果实为主要目的的经济林育种优势尤其明显。因此，开展油茶高含油率的MAS育种将有效缩短油茶育种周期，且具有巨大的应用潜力。

油茶的分子标记辅助育种研究已有几十年的历史，包括RAPD、ISSR、SRAP等多种分子标记技术，取得了一定的成果。但这些技术均表现出一定的弊端，所获得的多态性标记位点很难真正用于油茶辅助育种。主要弊端包括：1、这些标记均属于显性标记，无法准确的体现多态性位点的基因型；2、这些标记技术对实验操作人员及环境要求较高，实验结果不稳定；3、这些标记技术均是对整个基因组序列进行分析，工作量大，无法将多态性位点精准定位，亦很难筛选到与目的性状紧密连锁的标记；4、传统的数量性状位点(quantitativetrait loci，QTL)作图需要具有亲缘关系的作图群体，油茶童期长的生物特性，使得创建大规模的油茶杂交作图群体耗时长，难度大且需占用大面积林地。因此，以自然群体为研究对象，采用共显性SNPs标记，通过连锁不平衡作图开发与油茶种子含油率关联的多态性位点，筛选可稳定用于早期辅助选择的标记，成为油茶有效的分子标记辅助育种策略。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供与油茶种子含油率相关的SNP分子标记。

本发明的第二个目的是提供检测该SNP分子标记的方法。

本发明的第三个目的是提供一种鉴定高含油率油茶的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

(1)在油茶全分布区内广泛收集油茶种质资源，建立种子含油率广泛分离的油茶自然群体。

(2)采用KAC法(TaKaRa试剂盒Code No.9768)提取自然群体500个单株的嫩叶总DNA，并用0.8％～1％的琼脂糖凝胶电泳及核酸测定仪测定提取DNA的质量，要求DNA无降解，无蛋白质、多糖等杂质污染，浓度达100ng/μL以上。

(3)采集关联群体500份油茶种质的完全成熟种子，用索氏抽提法测定种子含油率。