[发明专利]一种特异识别c-Myc标签的单域重链抗体

说明书

本发明属于基因工程领域，具体为针对c‑Myc标签的单域重链抗体，其具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，可用于免疫检测、抗原富集纯化等领域。本发明所提供的氨基酸序列可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质(亲和性、特异性、稳定性等)更好的突变体，用来发展进一步用于医药、工业、农业的蛋白质或多肽。

技术领域

本发明涉及单域重链抗体技术(又称纳米抗体技术)，以及基因工程抗体技术，特别是针对c-Myc标签的单域重链抗体或多肽。

技术背景

c-Myc标签蛋白的发现源于1985年Evan制备获得了一株针对人原癌基因产物Myc蛋白的单克隆抗体9E10，此后研究发现该抗体识别的表位由10个氨基酸残基组成，其序列为Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu，并且这10个氨基酸与其它蛋白融合表达后依然能够保持很强的抗原活性，可以被相应抗体识别，而且不受到蛋白框架的影响。因此，c-Myc标签系统广泛应用于免疫学检测、细胞成像、亲和纯化以及蛋白质工程等领域。

本发明公开了一种可以与c-Myc标签特异性结合的单域重链抗体(即纳米抗体，下同)，可用于c-Myc标签融合蛋白的检测及纯化。

目前市场上已经有针对c-Myc标签的单克隆或多克隆抗体用于检测，但单克隆抗体的研发和生产过程及其繁琐和复杂，多克隆抗体来源有限。相比之下，单域重链抗体仅由一个结构域组成，具有耐酸碱、耐高温、特异性高、分子量小和可大规模生产等优点，用单域重链抗体作为配基制备的纯化介质具有成本低、可重复使用等优点，应用前景广阔。

发明内容

本发明的目的是提供针对c-Myc标签的单域重链抗体，可以被用于制备检测和纯化c-Myc标签的试剂和工具。

本发明提供一个针对c-Myc标签的单域重链抗体(即本发明一种特异识别c-Myc标签的纳米抗体，下同)，具有SEQ ID NO.:1所示的氨基酸序列。其氨基酸序列的IMGT编号和结构域的划分包括四个框架区(Framework region,FR)和三个互补决定区(Complementarity-determining region,CDR)。

本发明提供一个核酸分子，其特征是编码SEQ ID NO.:1，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。

本发明还提供一个核酸分子，其特征是编码SEQ ID NO.:1部分结构域，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。可以为SEQ ID NO.:2核酸分子。

本发明所提供的核苷酸序列或者至少部分序列可以通过合适的表达系统进行表达以得到相应的蛋白质或多肽。这些表达系统包括细菌，酵母菌，丝状真菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或无细胞表达系统。

本发明还提供一种载体，包含所述核酸序列。由于遗传密码子具有简并性，该核酸序列可以根据不同的应用目的而不同。

本发明还提供一种宿主细胞，包括所述蛋白质或表达载体。

本发明还提供一种检测c-Myc标签的方法，含有本发明所述针对c-Myc标签的单域重链抗体。基于本发明提供的针对c-Myc标签的单域重链抗体与c-Myc标签特异性结合的能力，建立c-Myc标签的检测方法。其中，优选的方法包括酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)，荧光免疫法(Fluoroimmunoassay,FIA)，免疫芯片法，亲和层析法和免疫层析法等。

本发明所提供的氨基酸序列可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质(水溶性、稳定性、亲和力以及特异性等)更好的突变体，该突变体能与c-Myc标签特异性结合。

本发明还涉及前述针对c-Myc标签的单域重链抗体在免疫检测、富集以及纯化中的应用。这些免疫检测指的是非疾病诊断治疗目的的免疫检测。