[发明专利]在用人胎儿肝干细胞注射的免疫缺陷动物中产生抗体的方法

权利要求书

1.从免疫缺陷型非人类动物中产生人单克隆抗体的方法，所述方法包括将新生免疫缺陷型非人类动物与CD133+人类胎儿肝干细胞接触来产生免疫移植的非人类动物(重建动物)，随后将所述重建动物与抗原接触，从所述重建动物中收集产生针对所述抗原的人抗体的人细胞，并从所述抗体产生细胞中分离所述抗体。

2.权利要求1的方法，其特征在于所述免疫重建的非人类动物是啮齿类动物。

3.权利要求1或2的方法，其特征在于所述重建的非人类动物是小鼠或大鼠。

4.权利要求1到3的方法，其特征在于所述重建小鼠是Rag2^-/-γc^-/-、裸Rag 2-/-、NOD或SCID米色小鼠。

5.权利要求1到4的方法，其特征在于所述胎儿肝干细胞是人类造血胎儿肝干细胞。

6.权利要求1到5的方法，其特征在于所述胎儿肝干细胞是人类造血胎儿肝干细胞和人类非造血胎儿肝干细胞的组合。

7.权利要求1到6的方法，其特征在于所述抗体产生细胞是人的B细胞。

8.权利要求1到7的方法，其特征在于所述抗原是多肽。

9.权利要求1到8的方法，其特征在于所述抗原作为抗原、抗原片段、MHC/肽复合体、编码抗原的DNA和/或抗原携带细胞与所述重建动物接触。

10.权利要求1或9的方法，其特征在于所述重建的非人类动物在与所述人类胎儿肝干细胞接触前被亚致死照射。

11.权利要求1到10的方法，其特征在于所述小鼠在与所述人类胎儿肝干细胞接触后5到18周第一次与所述抗原接触。

12.权利要求1到11的方法，其特征在于所述小鼠与所述抗原接触高达10次。

13.权利要求1到12的方法，其特征在于所述收集的细胞是人CD19⁺或CD22⁺细胞。

14.权利要求1到13的方法，其特征在于所述细胞通过杂交瘤技术建立。

15.权利要求14的方法，其特征在于用于所述杂交瘤技术的融合伴侣细胞系是MFP-2、HK-128、K6H6/B5或Karpas 707细胞系。

16.用于产生多数人类B细胞的方法，所述人类B细胞产生多数针对抗原的人抗体，所述方法的特征在于将新生免疫缺陷的非人类动物与CD133+人类胎儿肝干细胞接触来产生免疫重建动物，随后将所述重建动物与抗原接触，从所述非人类动物中收集所述产生多数抗体的人类B细胞。

17.重组产生抗体的方法，其特征在于将新生免疫缺陷的非人类动物与CD133+人类胎儿肝干细胞接触，随后将所述非人类动物与抗原接触，从所述非人类动物中收集产生针对所述抗原的人抗体的人细胞，并分离所述抗体，将可变区测序，构建编码重链和/或轻链至少CDRs与人恒定链组合的表达载体，在合适的宿主细胞中表达所述载体并从所述宿主细胞或发酵上清液中分离所述抗体(免疫活性蛋白)。

18.重组产生抗体的方法，其特征在于将新生免疫缺陷的非人类动物与CD133+人类胎儿肝干细胞接触，随后将所述非人类动物与抗原接触，从所述非人类动物中收集产生针对所述抗原的人抗体的人细胞，并从产生人抗体的所述人细胞中分离mRNA，产生抗体特异性cDNA(例如通过使用免疫球蛋白特异性引物)，构建编码重链和/或轻链至少CDRs与人恒定链组合的表达载体，在合适的宿主细胞中表达所述载体并从所述宿主细胞或发酵上清液中分离所述抗体(免疫活性蛋白)。