[发明专利]一种定量免疫抑制法测定脂蛋白相关磷脂酶A2的检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于体外检测试剂技术领域，具体涉及一种定量免疫抑制法测定脂蛋白相关磷脂酶A2的检测试剂盒及应用。

背景技术

脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）是近年来引起广泛关注的一种与动脉粥样硬化和缺血性心脑血管疾病密切相关的磷脂酶A2超家族成员，其可以作为一种新的炎症反应标记物和预测心脑血管疾病的独立危险因子。

目前现有技术中Lp-PLA2的检测方法有酶生化测定及免疫质量测定两种；前者酶生化测定法是基于Lp-PLA2酶活性催化底物而建立的，具有即时反应血清中Lp-PLA2活性的优点，但该方法检测体系易受到磷脂酶家族其他酶或同工酶、检测环境的干扰而影响检测结果；后者免疫质量测定法是基于抗原抗体特异性反应的原理而测定Lp-PLA2的质量，其具有高特异性但无法区别失活的的酶及代谢产物，从而无法反映具有生物活性的Lp-PLA2的真实含量；因此目前的两种检测方法都存在一定的不足之处，方法学的差异使得两者在相同样本中的检测差异明显，检测结果精确度不高。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明要解决的技术问题是：如何提供一种定量免疫抑制法测定脂蛋白相关磷脂酶A2的检测试剂盒及应用，使其具有稳定性好、测试效率高、测试结果准确、灵敏度高的特点，能够解决现有Lp-PLA2的检测方法存在的容易受到外界干扰影响而导致检测结果不准确，或无法反映具有生物活性的Lp-PLA2的真实含量的技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种定量免疫抑制法测定脂蛋白相关磷脂酶A2的检测试剂盒，包括Lp-PLA2 R1试剂和Lp-PLA R2试剂；其中，所述Lp-PLA2 R1试剂的组分包括缓冲物质对、防腐剂和水；所述Lp-PLA2 R2试剂的组分包括缓冲物质、抗人LP-PLA2 酶活力抗体、1-十四酰-2-(4-硝基苯基琥珀酰)卵磷脂、1-壬烷磺酸钠、维生素E、防腐剂和水。

进一步，所述Lp-PLA2 R1试剂中所述缓冲物质对为磷酸二氢钾和磷酸氢二钾；所述防腐剂为proclin 300。

进一步，将磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、proclin 300和水按照1.5~3.6 g：0.8~2.4 g：20 μL：100 mL的质量体积比混合，配制成所述Lp-PLA2 R1试剂。

作为优化，所述抗人LP-PLA2抗体为鼠源抗人LP-PLA2 酶活力抗体、兔源抗人LP-PLA2 酶活力抗体或者羊源抗人LP-PLA2酶活力抗体。

作为又一优化，所述Lp-PLA2 R2试剂中所述缓冲物质为柠檬酸，所述防腐剂为proclin300。

作为进一步优化，将1-十四酰-2-(4-硝基苯基琥珀酰)卵磷脂、抗人LP-PLA2酶活力抗体、柠檬酸、1-壬烷磺酸钠、维生素E、proclin 300和水按照0.25~0.8 g：0.5~2 mg：0.03~0.2 g：0.04~0.2 g：0.02~0.06 g：20 μL：100 mL的质量体积比混合后，调节混合溶液的pH至5.00~7.00，配制得所述Lp-PLA2 R2试剂。

上述检测试剂盒在对样品中脂蛋白相关磷脂酶A2含量进行检测方面的应用。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、本发明提供一种基于免疫检测及酶生化结合的检测技术的试剂盒，原理为在检测试剂盒的试剂中使用抑制Lp-PLA2酶活性的单克隆抗体，其能够特异地识别和阻断Lp-PLA2酶活性，通过酶生化测定被抑制的酶活性，即能精确地测定Lp-PLA2酶活性，完成对样品中脂蛋白相关磷脂酶A2进行检测，该方法兼具酶生化测定及免疫质量测定的优点，解决现有Lp-PLA2的检测方法存在的容易受到外界干扰影响而导致检测结果不准确，或无法反映具有生物活性的Lp-PLA2的真实含量的技术问题，为Lp-PLA2的临床检测及应用研究提供更加可靠的技术手段。

2、本发明检测试剂盒具有稳定性好，测试效率高，测试结果准确，灵敏度高的优点，经试验验证，采用本发明检测试剂盒分析灵敏度最低为0.0018 A/nmol/min/mL，检出限低，精密度达到3.08%，可以准确地重复试验结果，使实验结果更加准备可靠。

3、本发明检测试剂盒具有操作简单、快速、精确度高、自动化程度高的优点，适用于在临床上广泛使用，特别是对急诊能实现快速定量测定。

具体实施方式