[发明专利]1H-[1,2,3]三氮唑并[4,5-c]喹啉衍生物及其制备方法和用途

说明书

本发明属于化学医药领域，具体涉及1H-[1,2,3]三氮唑并[4,5-c]喹啉衍生物及其制备方法和用途。本发明提供了一种1H-[1,2,3]三氮唑并[4,5-c]喹啉衍生物，其结构如式Ⅰ所示。本发明还提供了上述1H-[1,2,3]三氮唑并[4,5-c]喹啉衍生物的制备方法和用途。

技术领域

本发明属于化学医药领域，具体涉及1H-[1,2,3]三氮唑并[4,5-c]喹啉衍生物及其制备方法和用途。

背景技术

Cdc2样激酶(cdc2-like kinases，CLKs)是一种进化保守的双特异性激酶，属于CMCG家族，其能够同时磷酸化蛋白底物上的丝氨酸、苏氨酸以及酪氨酸。CLK激酶家族由四种亚型构成，分别为CLK1、CLK2、CLK3、CLK4；结构上，它们的C端具有高度保守的结构域；功能上，它们主要负责细胞内mRNA的选择性剪切。由于CLKs四种亚型在结构、功能上的高度重合，人们一般选择代表性的CLK1作为研究对象。CLK1，又称为STY，是一种核激酶。PC12细胞中CLK1的表达能够诱导神经元分化，显示CLK1在神经发育中的重要作用。CLK1诱导PC12细胞分化的能力与CLK1依耐性MAP激酶级联反应相关，提示CLK1的功能可能是通过信号传导通路实现。CLK1促进HIV-1Gag蛋白的表达；Alexander发现CLK1小分子抑制剂TG003能够以超过两个数量级的效率减弱流感病毒在宿主内的复制，他们研究认为，这是病毒M2蛋白信使RNA的选择性剪切损伤引发的。在癌细胞及相关细胞中，通过拮抗机制，即选择性信使RNA剪切因子45(SPF45)诱导的6号外显子从fas蛋白mRNA排除，CLK1调控SPF45的过表达。当SPF45过表达导致肿瘤出现增强的迁移、侵袭能力，这依耐于CLK1的生化调节(辨别磷酸化位点以及纤维连接蛋白、皮层肌动蛋白的调节)；而当抑制了CLK1活性，SPF45则通过蛋白酶体途径进行降解而抑制肿瘤迁移、侵袭。

目前认为，与CLK1关系最紧密的疾病模型为阿尔兹海默症(Alzheimer’sdisease，AD)。阿尔兹海默症是一种神经退行性疾病，其主要的标志为神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFT)、异常突起，造成皮质淀粉样蛋白沉积。在超微结构下，神经元病变中含有大量成对的螺旋细丝(paired helical filaments，PHF)，而PHF最主要的生化构成为非正常形态的tau蛋白。因此，阿尔兹海默症中NFT主要由大量高度磷酸化的tau蛋白构成。Tau蛋白是一种微管相关蛋白，在微管的多聚化以及稳定微管中发挥重要作用，广泛涉及神经退行性疾病病例过程。人类的tau蛋白基因含有16个外显子，通过选择性剪切，在成人大脑中生成六种亚型的tau蛋白。Tau蛋白的C末端包含不充足的重复氨基酸序列，能够与微管蛋白结合并与微管相互作用。Tau蛋白基因10号外显子受到选择性剪切调控，负责编码这段重复的氨基酸序列，得到含有3个或4个微管结合域的tau蛋白，分别称为3R tau、4R tau。在健康个体中，3R以及4R tau蛋白的平衡是通过选择性剪切的调控实现，关键机制是通过磷酸化SR蛋白的丝氨酸残基。核质中的核斑包含贮存形式的SR蛋白，该形式的SR蛋白几乎不负责剪切的选择。通过CLK1的磷酸化，SR蛋白能够在核质内移动并且结合附近等待剪切的大的核糖核蛋白。在神经元中，核不均一核糖核蛋白(hnRNP)A/B家族的表达在选择性剪切中也具有至关重要的作用。但是，SR蛋白与hnRNP的具体作用有差别。磷酸化的SR蛋白结合剪切增强子，而hnRNP大多结合沉默子，反向抑制剪切。染色分析显示，在阿尔兹海默症患者神经核中hnRNP A/B减少而SR蛋白显著增多。因此，CLK激酶通过磷酸化SR蛋白调控tau蛋白转录位点的选择，从而影响tau蛋白的形态，进一步影响阿尔茨海默症。除此而外，其它表明CLK1与阿尔茨海默症有关的证据包括：氯碘羟喹，一种金属螯合剂，能够抑制培养细胞、线虫以及小鼠的CLK1活性。在AD、帕金森、亨廷顿疾病模型中，该药已广泛作为神经保护剂。加入铁离子、钴离子能够阻断氯碘羟喹作用于CLK1发挥的抗老化作用。金属阳离子占据CLK1的氯碘羟喹结合位点，表明螯合作用可能与氯碘羟喹抑制CLK1活性有关，但确切机制不明。Tania等发现CLK1抑制剂leucettine L41能够保护HT22细胞免受谷氨酸诱导的神经毒伤害，并且，降低淀粉样前体蛋白APP诱导的大鼠脑切片细胞死亡。2014年，Fant等研究表明CLK1抑制剂leucettine L41能够有效诱导自噬，通过基因敲除CLK1，进一步明确leucettine L41诱导自噬是基于其对CLK1的抑制，这为CLK1在阿尔兹海默症乃及自噬相关疾病中潜在价值提供了新的依据。