[发明专利]离子排斥-离子交换柱切换联用测定尿液中的γ-羟基丁酸的方法

说明书

一种离子排斥‑离子交换柱切换联用法测定尿液中的γ‑羟基丁酸的方法，首先，通过离子排斥法将尿液中强阴离子与γ‑羟基丁酸分离；然后，通过柱切换离子交换法将γ‑羟基丁酸与七氟丁酸分离。通过离子排斥‑离子交换柱切换联用法实现了尿液中γ‑羟基丁酸的快速和准确检测；与现有气质联用方法相比，该离子色谱法无需尿液的酯化前处理、可以直接上样，方法具有快速、操作简单、灵敏度高的优点。

技术领域

本发明涉及一种离子排斥-离子交换柱切换联用法测定尿液中的γ-羟基丁酸的方法。

背景技术

γ-羟基丁酸又称4-羟基丁酸(4-Hydroxybutanoic acid)，或GHB，是一种中枢神经抑制剂，具有强的镇静和健忘效果而受到不法人群的青睐，滥用现象越来越严重，如用作迷奸等，带来严重的社会问题。因此，在许多国家γ-羟基丁酸被认定为毒品。历史上，γ-羟基丁酸曾被用作常用镇静剂，用于治疗失眠、抑郁症、发作性嗜睡病和酗酒，也被用于提高运动员成绩；在实际使用中，通常使用γ-羟基丁酸的钾盐或钠盐。γ-羟基丁酸，是一种在中枢神经系统中发现的天然物质，亦存在于葡萄酒、牛肉、柑橘属水果中，也少量存在于几乎所有动物体内。γ-丁内酯(GBL)和1,4-丁二醇(1,4-BD)是GHB的前体，被看作摄取后转化为GHB的相关物质；GBL在酶催化条件下或是增高pH的情况下，很快转化为GHB；1,4-BD在人体内很快代谢为GHB，在国外GBL和1，4-BD的滥用比较严重；GBL和1,4-BD在摄入人体内后会很快转化为GHB，因此在人体内可以仅考虑GHB的含量。同时，γ-羟基丁酸可在人体细胞内合成，结构上与酮体β-羟基丁酸酯相似；γ-羟基丁酸可在哺乳动物大脑内自然合成，并发挥神经递质的作用，琥珀酸半醛脱氢酶缺乏症可造成GHB在血液中累积，造成麻醉效果；γ-羟基丁酸也可由发酵产生，因此也存在于一些啤酒或葡萄酒中。

γ-羟基丁酸分子量小，具有羟基和羧基两个极性较大的基团，因此其具有较强的极性和水溶性。目前，气相色谱法(GC)、气相-质谱联用法(GC-MS)、液相色谱法(LC)、液相-质谱联用法(LC-MS)、傅立叶红外光谱法(FTIR)和毛细管电泳法(CE)已经用于GHB的检测，但都首先需要液液萃取和固相萃取等前处理方法将其从检材中提取出来。γ-羟基丁酸是一种内生性生物物质，据统计，内生GHB在尿液中的含量小于10mg L^-1，全血和血浆中含量小于4mg L^-1；对于GHB服用者，相应尿液和血液中的含量可增长到10-1000倍；由于GHB在人体内代谢速度快，服用后8-12h内，相应体液中的含量就可降至内生浓度水平。值得注意的是GHB酸尿症病人的血清和尿液的内源性GHB浓度分别可高达100mg L^-1和250mg L^-1。

γ-羟基丁酸是一种低分子量的有机弱酸，可以采用离子色谱法进行分离检测。在生物样品如血液、尿液、头发和组织等中，尿液是最具有价值的样本。现有的GC、GC-MS、LC、LC-MS法都需要对尿液进行前处理，首先GHB在强酸条件下进行酯化反应生成GBL然后再用有机溶剂将其提取出来进行仪器测试。

发明内容

本发明针对现有测定尿液中γ-羟基丁酸的GC、GC-MS、LC、LC-MS法都需要对尿液进行前处理(GHB在强酸条件下进行酯化反应生成GBL然后再用有机溶剂将其提取出来进行仪器测试)，操作复杂、繁琐，回收率低的缺点；开发一种离子排斥-离子交换柱切换法来直接测定尿液中的γ-羟基丁酸，尿液无需酯化可以直接进行离子色谱检测。离子排斥法可以直接实现γ-羟基丁酸的分离检测，但是该方法检测灵敏度低；离子交换测定尿液中的γ-羟基丁酸受基质影响较大，但通过与离子排斥法联用柱切换可以提高γ-羟基丁酸测定的灵敏度，进而满足尿液中γ-羟基丁酸检测要求。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种离子排斥-离子交换柱切换联用法测定尿液中的γ-羟基丁酸的方法，它如图1所示，它包括如下步骤：