[发明专利]一种抑制前蛋白转化酶枯草溶菌素9表达的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种抑制前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达的方法，可通过使用露那辛(lunasin)抑制机体前蛋白转化酶枯草溶菌素9的产生，降低前蛋白转化酶枯草溶菌素9的血清水平。可进一步将露那辛作为前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂用于制备治疗前蛋白转化酶枯草溶菌素9介导的相关疾病的药物。

背景技术

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)(proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9)是一种由692个氨基酸组成的糖蛋白，属前蛋白转化酶(proprotein convertases,PCs)家族中的第九个成员，是一种分泌型丝氨酸蛋白酶，主要在肝脏和肠道等组织中表达，然后分泌到血液中(J Biol Chem.2004；279(47):48865-48875；Trends Biochem Sci.2007；32(2):71-77)。PCSK9进入血液循环后可与肝细胞表面的低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDL-R)的表皮生长因子样结构域特异性结合，引导其进入肝细胞到达溶酶体，使LDL-R在溶酶体中降解，从而导致肝细胞表面LDL-R减少，进而降低肝脏结合和清除LDL-C的能力，最终导致血液中LDL-C水平升高(Proc Natl Acad Sci U S A.2008；105(35):13045-13050)。因此，可通过抑制PCSK9治疗高胆固醇血症(Annu Rev Pharmacol Toxicol.2014；54:273-293)。此外，最新研究显示，PCSK9升高与肥胖及2型糖尿病(Pediatr Diabetes.2017.PMID:28093849,DOI:10.1111/pedi.12490；Diabetes Metab Res Rev.2016；32(2):193-199.)密切相关，也与肾病综合症及蛋白尿等慢性肾病(Int Urol Nephrol.2017.PMID:28084558，DOI:10.1007/s11255-017-1505-2)密切相关，因此，通过抑制PCSK9可以成为预防和治疗这些与其相关的疾病的重要手段。

目前已有多种PCSK9抑制剂处于研发阶段或已获批上市成为治疗高胆固醇血症的药物，其中主要包括：1、抗PCSK9抗体抑制剂，如美国Amgen公司的Evolocumab(AMG145)及Regeneron/Sanofi公司的Alirocumab(REGN727/SAR236553)已在美国和欧洲获批上市(J Clin Pharmacol.2017；57(1):7-32)；2、小干扰RNA(SiRNA)抑制剂，如Alnylam公司的ALN-PCS可抑制PCSK9的转录，目前已进入I期临床试验(Pharmacol Ther.2016；164:183-194)；3、小分子化合物，如小檗碱可以抑制PCSK9的转录和翻译(J Biol Chem.2015；290(7):4047-4058；Atherosclerosis.2008；201(2):266-273)。

露那辛(lunasin)是一种最初从大豆中分离得到的活性肽，由43个氨基酸残基组成，其序列为:SKWQHQQDSCRKQLQGVNLTPCEKHIMEKIQGRGDDDDDDDDD(SEQ ID NO:1)，分子量为5KDa(J Biol Chem.1987；262(22):10502-10505)。已有研究表明，多肽露那辛具有抗肿瘤活性，在体外可抑制非小细胞肺癌细胞的增殖(Oncotarget.2015；6(7):4649-4662)，抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭(Oncol Rep.2016；36(1):253-262)，在体内可抑制小鼠皮肤癌和乳腺癌的发生(J Food Sci.2010；75(9):H311-316)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制PCSK9的方法，具体说是通过用多肽露那辛(lunasin)抑制肝细胞组织中前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达的方法。PCSK9是一种分泌型丝氨酸蛋白酶，主要在肝脏、小肠等组织中表达后分泌到血液中，现已发现PCSK9与高胆固醇血症、肥胖、2型糖尿病、肾病综合症及蛋白尿等慢性肾病密切相关，本发明提供了一种采用多肽露那辛有效抑制PCSK9生成的方法，可应用于制备上述与PCSK9相关的疾病的制剂或药物。

本发明具体技术方案如下：