[发明专利]一种利用盐芥与拟南芥的嫁接体系研究植物耐逆分子机理的方法

权利要求书

1.一种利用盐芥与拟南芥的嫁接体系研究植物耐逆分子机理的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将盐芥种子经消毒处理后，播种于含有琼脂粉的1/2MS培养基上，层积后转入长日照光照条件下培养；待盐芥萌发时，将拟南芥种子进行消毒处理，并播种于含有琼脂粉的1/2MS培养基上，层积或直接置于长日照光照条件下培养；盐芥种子和拟南芥种子消毒处理的方法为：用浓度为0.5％的NaClO消毒6-8分钟，然后用无菌水清洗4-6次；所述1/2MS培养基中琼脂的质量百分含量为1.2％；所述长日照培养的条件为：16h光照/8h黑暗，光照条件下的温度为21-23℃，黑暗条件下的温度为18-20℃，光强为8000lux，相对湿度大于70％；

(2)在无菌条件下进行拟南芥/盐芥的嫁接、拟南芥/拟南芥的自嫁接、盐芥/盐芥的自嫁接和盐芥/拟南芥的嫁接；

拟南芥/盐芥的嫁接方法为：将萌发后7-10天的盐芥的真叶及生长点切去，只保留两片子叶作为砧木；将萌发后3-5天的拟南芥下胚轴距上端1/4处切下作为接穗，嫁接到盐芥砧木上；

盐芥/拟南芥中萌发时期为萌发后7-10天的盐芥为接穗，以萌发后5-7天的拟南芥为砧木；

使用双面刀片切割嫁接材料；将作为砧木拟南芥或盐芥移至另一含有琼脂粉的1/2MS培养基中，并套上长3-6mm，内径/外径为0.3mm/1.5mm的无菌塑料管，在解剖镜下将接穗的下胚轴与砧木在无菌塑料管内对接形成嫁接体，最后将培养皿迅速封口；

(3)将嫁接好的拟南芥/盐芥、拟南芥/拟南芥、盐芥/盐芥和盐芥/拟南芥复合体置于短日照条件下培养，得嫁接苗；嫁接好的拟南芥/盐芥、拟南芥/拟南芥、盐芥/盐芥和盐芥/拟南芥复合体在短日照条件下的培养时间分别为：6-8天、6-8天、10-12天和10-12天；短日照培养的条件为：8h光照/16h黑暗，光照条件下的温度为21-23℃，黑暗条件下的温度为18-20℃，光强为8000lux，相对湿度大于70％；

(4)将嫁接苗移栽至水培营养液中继续培养，然后用NaCl进行处理，对嫁接苗盐处理前后离子组含量进行检测，并提取RNA进行转录组表达谱检测；所述水培营养液为1/2Hogland营养液；

所述的种子消毒、播种和嫁接过程均是在无菌超净台中操作。