[发明专利]一种促进肺癌细胞生长的方法有效
| 申请号： | 201710108302.4 | 申请日： | 2017-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN106906184B | 公开（公告）日： | 2021-04-23 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 广东昭泰体内生物医药科技有限公司;湖南昭泰涌仁医疗创新有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋;侯桂丽 |
| 地址： | 510663 广东省广州市高新技术产业*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 促进 肺癌 细胞 生长 方法 | ||
1.一种促进肿瘤细胞生长的方法，其特征在于，包括如下步骤：将肿瘤细胞与CD45+CD215+细胞和IL15细胞因子共培养；
所述CD45+CD215+细胞来自于第三代免疫缺陷小鼠NOD-scid-IL2Rγ-/-；
所述CD45+CD215+细胞与所述肿瘤细胞的比例为(150-460):1；
所述CD45+CD215+细胞的接种密度为(1-5)×104/mL；
所述IL15细胞因子的接种密度为50-600ng/mL；
所述共培养的培养基为1640培养基、体积比为10％胎牛血清、体积比为1％青霉素/链霉素双抗和20ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；
所述共培养的温度为35-40℃；
所述共培养的湿度为90-98％；
所述共培养的CO2浓度为2-10％；
所述共培养的时间为110-150h；
所述共培养的过程需要每1-4天进行半换液；
所述肿瘤细胞为肺癌细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述肿瘤细胞为肺癌细胞；
所述CD45+CD215+细胞与所述肿瘤细胞的比例为(180-350):1；
所述CD45+CD215+细胞的接种密度为(1-3)×104/mL；
所述IL15细胞因子的接种密度为100-500ng/mL；
所述共培养的温度为37℃；
所述共培养的湿度为92-97％；
所述共培养的CO2浓度为3-6％；
所述共培养的时间为115-130h；
所述共培养的过程需要每1-3天进行半换液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，
所述肿瘤细胞为A549肿瘤细胞；
所述CD45+CD215+细胞与所述肿瘤细胞的比例为300:1；
所述CD45+CD215+细胞的接种密度为2×104/mL；
所述共培养的湿度为95％；
所述共培养的CO2浓度为5％；
所述共培养的时间为120h；
所述共培养的过程需要每2天进行半换液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)共培养的前一天在96孔板内种入25-35个肺癌细胞，过夜培养；
(2)用1640培养基、体积比为10％胎牛血清、体积比为1％青霉素/链霉素双抗、20ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子组成的培养基重悬的CD45+CD215+细胞，控制密度在(1-5)×104/mL；
(3)培养前挑选出孔内肺癌细胞数量为25-35的孔用于共培养，加入重悬的CD45+CD215+细胞80-120μL和IL15细胞因子50-600ng/mL；
(4)在温度35-40℃、湿度90-98％和CO2浓度2-10％下进行培养110-150h，培养期间每1-4天采用新鲜的培养基进行半换液。
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