[发明专利]一种长瓣兜兰的组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明提供了一种长瓣兜兰组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：(1)自交授粉；(2)果荚采摘；(3)无菌播种；(4)增殖继代培养；(5)生根壮苗培养；(6)生根苗移栽。本发明还提供了一种适于长瓣兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系，包括萌发培养基、增殖培养基和生根壮苗培养基，其可用于上述长瓣兜兰组培快繁方法中。本发明另外还提供了长瓣兜兰果荚的最佳采摘期，即在长瓣兜兰自交后270‑330左右采摘果荚。通过本发明的方法培养的种苗萌发率高、健壮、根系发达、生长周期短，同时，本发明的方法简单易操作，生产成本低，为长瓣兜兰商业化生产提供了很好的基础。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体而言，本发明涉及一种长瓣兜兰组织培养快速繁殖的方法、一种适于长瓣兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系以及一种确定长瓣兜兰果荚最佳采集期的方法。

背景技术

兜兰属(Paphiopedilum)是兰科植物中最具特色最原始的类群之一。兜兰属植物由于独特的花型、绚丽的花色、持久的花期而具有极高的观赏价值，是国际花卉市场上十分流行的高档花卉，在世界上拥有大量的爱好者。近年来，在国内外兰展和花展上出现了越来越多的兜兰，随着人们生活水平的提高，越来越多的人开始喜欢和消费这一名贵兰花。兜兰产业已经悄然起步，很多兜兰杂交种和原生种都已经能够经过无菌播种，适宜栽培基质的栽培，作为高档的年宵花满足消费者的高端需求。然而，令人遗憾的是，市场上绝大多数原产于我国的兜兰都是从山上直接采挖的“下山兰”。由于其分布区域狭窄、原产地气候异常、生境丧失、资源遭受掠夺性采挖，兜兰种群数量正在迅速减少而濒临灭绝。

长瓣兜兰(Paphiopedilum dianthum)是附生兰，常附生在石缝或岩壁上，叶片2-5枚，粗厚，花莛高30-80cm，花通常2-4朵，花瓣黄绿色并有深浅不同的条纹，带状扭曲下垂，唇瓣褐黄色或浅褐色，花期一般在7-9月。长瓣兜兰为我国特有种，叶色浓绿厚实，花型优雅，是《国家重点保护野生植物名录》一级保护植物，也是中国仅有的几种多花型兜兰之一。由于长瓣兜兰种子没有胚乳而只有发育不完全的胚，种子在自然条件下极难萌发，且繁殖率低。因此，采用组织培养技术有利于解决其繁殖困难的问题并且可以在短期内提供大量种苗。然而，现有技术中鲜有关于长瓣兜兰组织培养技术的报道，仅王莲辉等(王莲辉等,“长瓣兜兰的组织培养与快速繁殖”,《植物生理学报》,2009,45(9):887-888)对长瓣兜兰进行了无菌播种及组培快繁实验，证明1/2MS+100mL·L-1椰汁或者MS+100mL·L-1椰汁的培养基比较适合种子萌发，能达到60％以上；1/2MS+6-BA 0.2+NAA 1.0+100mL·L-1椰汁是最佳增殖继代培养基，80-90天能继代一次；1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.2+2g·L-1活性炭是比较好的生根培养基。

因此，为了保护长瓣兜兰的野生资源同时满足消费者的需求，有必要提供一种长瓣兜兰的快速繁殖体系，以缩短其培养周期、提高种苗成活率和幼苗质量、降低成本，从而满足市场对这一观赏花卉不断增长的需求。

发明内容

为了解决上述问题和克服现有技术中的缺陷，本发明提供了一种长瓣兜兰组织培养快速繁殖的方法、一种适于长瓣兜兰组织培养快速繁殖的培养基体系以及提供了长瓣兜兰果荚的最佳采集期。

本发明的第一方面提供了一种长瓣兜兰组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：

(1)自交授粉：选择花大色艳的长瓣兜兰进行异花授粉；

(2)果荚采摘：在长瓣兜兰自交后240-330天左右采集果荚；

(3)无菌播种：以采集的果荚为外植体进行消毒，切开果荚将种子接种在萌发培养基中进行暗培养大约40-50天，待30％种子长出原球茎，转为光照周期为12h培养；

(4)增殖继代培养：将步骤(3)中产生的幼苗接种到增殖培养基中，每4周继代一次，增值率达3倍；