[发明专利]基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法

权利要求书

1.一种基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）将家蚕质型多角体病毒多角体蛋白基因克隆进pFastBacDual质粒的EcoRI 和XbaI之间，构建重组转移pFastBacDual-polh质粒；

（2）合成融合DNA序列；所述融合DNA序列如SEQ ID NO:3所示；

（3）将步骤（2）的融合DNA序列克隆进步骤（1）的pFastBacDual-polh质粒的XhoI和KpnI位点，获得pFast-VP3-cyHV-polh质粒；

（4）将步骤（3）的pFast-VP3-cyHV-polh质粒转化感受态细胞，涂布于含培养基的琼脂平板上，于37℃培养，挑取白色菌落，提取重组Bacmid-VP3-cyHV-polh DNA；

（5）将步骤（4）的重组Bacmid-VP3-cyHV-polh DNA转染家蚕培养细胞，26～27℃培养，细胞发病后，收集细胞培养上清，获重组病毒BmNPV- VP3-cyHV-polh；

（6）将步骤（5）的重组病毒BmNPV-VP3-cyHV-polh接种家蚕或家蚕培养细胞，发病后，收集家蚕血淋巴或家蚕培养细胞，纯化多角体，获包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体；

步骤（4）中，所述感受态细胞为DH10/Bac感受态细胞；所述培养基为LB培养基添加四环素、卡那霉素、庆大霉素、X-gal、IPTG得到，四环素、卡那霉素、庆大霉素、IPTG 和X-gal在LB琼脂平板上的含量分别为10 µg/ml、50 µg/ml、7 µg/ml、40µg/ml和100 µg/ml；步骤（6）中，首先将步骤（5）的重组病毒BmNPV-VP3-cyHV-polh再次转染家蚕培养细胞，26～27℃培养，细胞发病后，收集细胞培养上清，获二代重组病毒BmNPV-VP3-cyHV-polh；然后将二代重组病毒BmNPV-VP3-cyHV-polh接种家蚕；所述家蚕为4～5龄幼虫或蚕蛹。

2.根据权利要求1所述基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法，其特征在于，步骤（1）中，以家蚕质型多角体病毒的基因组RNA或家蚕质型多角体病毒感染的中肠组织的总RNA为模板，反转录成cDNA后，通过PCR扩增获得家蚕质型多角体病毒多角体蛋白基因。