[发明专利]一种基于铽和适配体的丙溴磷荧光检测方法

权利要求书

1.一种基于铽和适配体的丙溴磷荧光检测方法,其特点是利用富含G的核苷酸单链(帮助链)能够增强铽的荧光作用，以及核酸适配体对目标物的特异性识别作用，包括以下步骤：通过测定荧光光谱图观察帮助链、核酸适配体、铽、丙溴磷体系的反应；通过测定荧光光谱图检测非标记核酸适配体传感器对丙溴磷的选择性以及通过荧光检测来测定实际样品中的丙溴磷。

2.如权利要求1所述的一种基于铽和适配体的丙溴磷荧光检测方法，通过测定荧光光谱图观察适配体、帮助链、铽以及丙溴磷体系反应的步骤如下：

取3个2.0mL的离心管，编号为a,b,c，分别依次加入，a管(4μM帮助链链50μL,10μM的铽离子50μL,pH 7.9的Tris-盐酸缓冲液400μL),b管(4μM帮助链50μL,6μM核酸适配体50μL,10μM的铽离子50μL,pH 7.9的Tris-盐酸缓冲液350μL),c管(4μM帮助链50μL,6μM核酸适配体50μL,10μM的铽离子50μL,2μM的丙溴磷50μL,pH 7.9的Tris-盐酸缓冲液300μL),在290nm的激发波长条件下测定荧光吸收光谱。

3.如权利要求1所述的一种基于铽和适配体的丙溴磷荧光检测方法，测定丙溴磷的步骤如下：

向含有6μM核酸适配体50μL,分别加入不同浓度的丙溴磷标准溶液，反应16min后，然后加入4μM帮助链50μL,10μM的铽离子50μL,pH 7.9的Tris-盐酸缓冲液350μL的混合体系中，室温条件下反应14min，测定该体系的荧光信号强度，铽的荧光信号强度将随着丙溴磷浓度的不同而发生变化。

4.如权利要求1所述的一种基于铽和适配体的丙溴磷荧光检测方法，对丙溴磷的选择性的测定步骤如下：

取6个2.0mL的离心管，依次编号为a～f，分别依次加入，a～f管(10μM铽50μL,4μM帮助链50μL,4μM核酸适配体50μL,2μM待测物质50μL,pH为7.9的Tris-盐酸缓冲液350μL，待测物质分别为(毒死蜱，乐果，辛硫磷，甲基对胺磷，敌敌畏，丙溴磷),在290nm的激发波长条件下测定荧光信号强度F₁-F₂，F₁-F₂分别为加入待测物质之前和之后的荧光信号值，结果显示只有加入丙溴磷的体系中出现荧光恢复效果。

5.如权利要求1所述的一种基于铽和适配体的丙溴磷荧光检测方法，其中所述实际样品的检测是取苹果提取液进行：

称取样品5g,于100mL离心管中，加入20mL乙腈，均质1min，4000r/min离心5min，将上清液转入已知20g氯化钠,50mL磷酸缓冲液的100mL具塞量筒内，40℃旋转蒸发至干，溶解在2mL娃哈哈纯净水中，进行实验，如权利要求3所述的测定丙溴磷的方法，加入不同浓度的丙溴磷标准溶液进行测定；根据F₁-F₂与丙溴磷的浓度建立标准曲线，丙溴磷的检出限为0.105μM，线性范围为1-12nM。