[发明专利]烟草幼苗中土霉素含量的检测方法

说明书

本发明公开了一种烟草幼苗土霉素含量的检测方法，依次进行以下步骤：将新鲜烟草幼苗叶1g用蒸馏水洗净磨碎，然后用体积浓度为5％甲酸水溶液进行匀浆；在匀浆液中加入提取液经漩涡振荡、超声处理、高速离心后过滤，得滤液；将滤液加入ODS C8固相萃取柱中进行吸附、洗脱，收集全部甲醇洗脱液，干燥后用0.2ml流动相进行溶解，超高速离心后，取上清液作为待测液；将待测液用高效液相色谱‑紫外色谱法检测；按照土霉素标准曲线方程Y＝15581X+201.56，获得待测液的土霉素质量浓度X，该X的单位为μg/mL；最后经换算获得新鲜烟草幼苗叶中的土霉素含量。

技术领域

本发明属于抗生素痕量检测技术领域，具体地说，涉及一种烟草幼苗土霉素含量的检测方法。

背景技术

抗生素在人类和动物疾病的预防与治疗、畜禽养殖和水产养殖中作为添加剂从而加快动物生长和促进增产方面都起到了极其重要的作用。人用和兽用的抗生素大部分不能被机体完全吸收，85％以上抗生素以原形或代谢物形式随粪尿排入环境，造成土壤与水体污染。抗生素及其代谢产物在土壤环境中性质稳定，难降解，易溶于水，极易向植物体内富集，其富集率可高达万倍以上，故当人畜粪便作为有机肥料施用于农田时，可能导致一些难降解、易吸附的抗生素(如喹诺酮类、磺胺类和四环素类)通过食物链积累，对人类健康产生危害。

烟草是我国重要的经济作物之一，面积和总产量居世界第1位。至今，烟草行业仍是我国某些省市县的经济支柱产业，在国民经济飞速发展中起着举足轻重的作用。随着社会的发展和进步，吸烟与健康问题越来越被人们所重视，烟草制品是以烟叶为原料的吸食品，因而，烟叶原料的安全性与广大消费者的健康息息相关，其安全性越来越受到消费者的关注。卷烟原料安全性主要指烟叶中含有的有毒有害物质的多少。烟叶有毒有害物质包括内源与外源两个方面。内源有害物质主要指烟草本身所含有的对人体有毒有害物质，如焦油、一氧化碳(烟叶燃烧产生而被人吸入)、苯酚、巴豆醛、亚硝胺、氢氰酸等，外源有害物质主要指农药残留、重金属等有害物质。一般认为，农药残留和重金属是烟叶质量安全的核心。抗生素作为一种新型的环境污染物，能够通过水、土壤和有机肥料进入到烟草生产环境中。这些抗生素可能会被烟草吸收，并在烟株体内驻留，经过长期蓄积，除可以显著影响烟草生长之外，可能经过烟草吸食进入吸烟者呼吸系统和消化系统中，从而对吸烟者健康造成危害。

目前，关于抗生素在烟草中研究，在国内外尤其是国内，其研究程度极其薄弱，只有零星的报道。高效液相色谱法检测蔬菜、鱼类、水以及药品等中的土霉素含量已经很成熟，但烟叶中土霉素抗生素含量的检测方法还没有报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种烟草幼苗土霉素含量的检测方法，该方法检测时间短，检查结果误差小、精确。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种烟草幼苗土霉素含量的检测方法，依次进行以下步骤：

1)、将新鲜烟草幼苗叶1g用蒸馏水洗净磨碎，然后用体积浓度为5％甲酸水溶液进行匀浆；

所述烟草幼苗叶与体积浓度为5％甲酸水溶液的重量比为1：1；

2)、称取(准确称取)匀浆液1.0g于带塞容器中(例如为15ml带塞试管中)，并向其中加入2.0毫升提取液；所述提取液由体积比为70：30的甲醇和超纯水组成；

将带塞试管密封后先进行漩涡振荡，然后超声处理，接着再高速离心，取上清液过滤，得滤液；

3)、将步骤2)的滤液加入ODS C8固相萃取柱中进行吸附，先用2ml纯水洗脱，然后用2ml甲醇(色谱甲醇)进行洗脱，收集全部甲醇洗脱液，干燥后用0.2ml流动相进行溶解，超高速离心后，取上清液作为待测液；

上述洗脱流速均为1.0ml/min；

4)、将待测液用高效液相色谱-紫外色谱法检测；