[发明专利]一种子宫内膜干细胞的培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种子宫内膜干细胞的培养基及其制备方法。

背景技术

干细胞(Stemcell，SC)是一种未分化细胞，这些细胞保持着高度增殖、自我更新和分化潜能的特性。干细胞可以定向分化为血液、骨骼、大脑及皮肤等其他组织。可能作为修复系统修复受损细胞。干细胞又可分为胚胎干细胞，脐血干细胞，成体干细胞及生殖干细胞等类型。干细胞在成体组织中调控成体细胞增殖、分化、凋亡及保持细胞数目的平衡中起到十分重要的作用。

人的子宫内膜是一个高度再生组织，在育龄期妇女中要经历400多次的增殖、分化和脱落。人子宫内膜由腺上皮细胞、间质细胞和血管组成，近年越来越多的研究表明，子宫内膜组织中存在一小群具有强大增殖和多向分化潜能的干细胞，可不断分裂增殖，及时补充脱落的终末分化细胞，使子宫内膜始终保持自我更新和再生能力。在月经周期的不同时期，内膜上皮和间质细胞的集落形成活性无明显差别。进一步的研究发现，内膜间质细胞在增生期的集落形成能力超过分泌期，而上皮细胞在分泌期的集落形成能力更强。因此可以推断，子宫内膜上皮和基质细胞具有子宫内膜干细胞的特性，在子宫内膜周期性脱落，增长中起到关键作用。现代妇产科学研究向细胞、亚细胞及分子水平发展，在体外成功的培养子宫内膜干细胞可为研究细胞的生长分化、代谢以及激素作用机制提供一个理想的实验模型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种子宫内膜干细胞的培养基及其制备方法。

本发明提供了一种用于子宫内膜干细胞培养的培养基，所述培养基为DMEM/F12培养基，并且含有10％-20％体积的胎牛血清。

进一步地，所述培养基中还含有黑色素，优选地，所述黑色素含量为0.2-5mg/ml。

更优选地，所述黑色素含量为1-3mg/ml。

最优选地，所述黑色素含量为2mg/ml。

进一步地，所述培养基中还含有亚硫酸氢钠，优选地，所述亚硫酸氢钠含量为5-20mg/ml。

更优选地，所述亚硫酸氢钠含量为8-15mg/ml。

最优选地，所述亚硫酸氢钠含量为10mg/ml。

进一步地，所述培养基中还含有抗生素。

优选地，所述抗生素为两性霉素、链霉素、或青霉素。

进一步地，所述培养基中还含有0.5-2％(w/v)(优选为1％)的两性霉素。

进一步地，所述培养基中还含有0.5-2％(w/v)(优选为1％)的链霉素。

进一步地，所述培养基中还含有0.5-2％(w/v)(优选为1％)的青霉素。

本发明提供了一种子宫内膜干细胞的培养方法，所述方法包括步骤:

将消化后的子宫内膜干细胞培养接种于培养基中，37℃、5％C0₂培养箱孵育，其中所述培养基为DMEM/F12培养基，并且含有10％-20％体积的胎牛血清，0.2-5mg/ml黑色素，和5-20mg/ml亚硫酸氢钠。

优选地，所述培养基为DMEM/F12培养基含15％体积的胎牛血清、黑色素2mg/ml、亚硫酸氢钠10mg/ml、1％(w/v)两性霉素、1％(w/v)链霉素、和1％(w/v)青霉素。

优选地，细胞接种密度为1×10³-3×10⁵个/ml。

本发明提供的培养基和培养方法，能够使得子宫内膜干细胞在培养过程中具有较高的增殖能力，且保持干细胞特性，适于在较短时间内培养大量的子宫内膜干细胞。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1为P8子宫内膜干细胞的显微照片。

图2显示了Nestin染色情况。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步陈述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件如美国Sambrook.J等著《分子克隆实验室指南》(黄培堂等译，北京：科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。

实施例1子宫内膜干细胞的原代培养