[发明专利]一种飞蝗细胞色素P450还原酶基因dsRNA及其应用

说明书

本发明提供一种飞蝗细胞色素P450还原酶基因dsRNA及其应用。具体是一种飞蝗细胞色素P450还原酶基因，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，基于SEQ ID NO：1，设计合成基因片段SEQ ID NO：7和相应的dsRNA。设计合成的dsRNA注射入飞蝗体内，飞蝗细胞色素P450还原酶基因表达水平下调，细胞色素P450还原酶酶活力下降，并导致西维因对飞蝗致死率提高至1.73倍‑2.3倍。本发明筛选获得的细胞色素P450基因可作为西维因抗性防治的分子靶标，为飞蝗西维因抗性治理提供新的途径。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种基于细胞色素P450还原酶基因片段合成的dsRNA及其在提高西维因防治飞蝗效果中的应用。

技术背景

西维因是一种用途极为广泛的氨基甲酸酯类杀虫剂，具有对人、畜毒性低，稳定性好，药效持久，起效迅速等优点，广泛使用在作物和森林的多种害虫的日常防治工作中。长期以来，反复使用以西维因为代表的氨基甲酸酯类杀虫剂防治飞蝗，已使得飞蝗对西维因产生较为严重的抗性，导致西维因防治剂量加大，蝗灾防治成本提高，过量使用西维因也对人类身体健康、对生态平衡造成潜在危害。目前已有通过传统的农药混配，交替轮换使用、开发新型杀虫剂等途径应用于飞蝗防治，但目前田间飞蝗抗药性危害依然十分严重。因此迫切需要研发一种新型的增强西维因对飞蝗防治效果的技术。

RNA干扰是指内源或外源双链RNA，在诱导沉默复合物与Dicer酶的作用下，专一性的诱导靶基因表达沉默的现象。由于RNA干扰可以沉默害虫农药抗性或抗性基因，对环境和高等动物安全，所以该技术被广泛地应用于害虫抗药性防治。

经检索发现，目前已有的飞蝗dsRNA相关专利申请如下：专利申请号201610316474.6，名称为“一种飞蝗肠道核酸水解酶基因在害虫防治中的应用”；专利申请号201610186141.6，名称为“飞蝗翅表皮蛋白基因及其在害虫防治中的应用”；专利申请号201610186149.2，名称为“飞蝗翅特异表皮蛋白基因及其dsRNA的应用”；专利申请号201510160191.2，名称为“Knickkopf基因dsRNA在害虫防治中的应用”；专利申请号201510160194.6，名称为“Retroactive基因及其dsRNA在害虫防治中的应用”；专利申请号201510118799.9，名称为“一种昆虫细胞色素P450基因及其应用”；专利申请号201510080636.6，名称为“昆虫几丁质去乙酰基酶基因1及其在害虫防治中的应用”；专利申请号201410647729.8，名称为“一种东亚飞蝗ATP合酶β亚基基因及其dsRNA在害虫防治中的应用”；专利申请号201410665503.0，名称为“一种东亚飞蝗ATP合酶α亚基基因及其dsRNA在害虫防治中的应用”；专利申请号201410292658.4，名称为“昆虫Ⅱ型几丁质酶基因特异性dsRNA的应用”；专利申请号201410069843.7，名称为“蝗虫Ⅰ型几丁质酶基因的序列及其dsRNA的应用”,专利申请号201310023385.9，名称为“昆虫UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶基因及其dsRNA的应用”；专利申请号201210356675.0，名称为“昆虫β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因及其应用”；专利申请号201010163625.1，名称为“一种昆虫几丁质合成酶1基因片段及其dsRNA和应用”；专利申请号201010163645.9，名称为“一种昆虫几丁质合成酶1A基因片段及其dsRNA和应用”；专利申请号201010163618.1，名称为“一种昆虫几丁质合成酶2基因和应用”；专利申请号201010163634.0，名称为“一种昆虫几丁质合成酶1B基因片段及其dsRNA和应用”，专利申请号201010136330.5，名称为“昆虫几丁质酶基因及其dsRNA的应用”。