[发明专利]4型蓝舌病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种4型蓝舌病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位多肽及其应用。本发明采用噬菌体展示技术对BTV VP2蛋白抗原表位氨基酸进行筛选。经过3轮淘选后进行测序，测序结果经分析比对后获得共同的短肽序列为¹⁶⁰NH¹⁶¹。实验证明，¹⁶⁰NH¹⁶¹与4A‑1G7上清、腹水均发生特异性反应并且¹⁶⁰NH¹⁶¹与1‑24型BTV阳性标准血清反应特异性良好。本发明的提出，对于4型BTV的临床诊断提供了新的技术手段，也为后续建立BTV的型特异性鉴别诊断方法以及4型BTV相关表位疫苗的制备奠定了物质基础。

技术领域

本发明涉及一种抗原表位多肽及其应用，特别涉及4型蓝舌病病毒VP2蛋白的中和性B细胞抗原表位多肽及其在诊断或治疗蓝舌病中的应用，本发明属于医药技术领域。

背景技术

蓝舌病(Bluetongue，BT)是一种在热带和亚热带国家常见，感染反刍动物的虫媒病毒性动物传染病。BT是由蓝舌病病毒(Bluetongue Virus，BTV)引起的，可感染羊、牛和骆驼等反刍动物的传染病。BTV感染动物，植物，昆虫并且通过诸如蚊子、库蠓、蜱虫等节肢动物传播。BTV属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)十二个属之一的环状病毒属(Orbivirus)。BTV最早发现于1876年，呈世界性分布。目前已从非洲、欧洲、亚洲、北美、南美和大洋洲的多个热带、亚热带和温带地区国家分离到BTV，并且其分布范围不断扩大，危害日趋严重。我国已检测出BTV-1、BTV-2、BTV-3、BTV-4、BTV-5、BTV-7、BTV-12、BTV-15、BTV-16、BTV-24十种血清型，其中BTV-1和BTV-16为我国主要的致病血清型。

VP2蛋白是构成BTV外壳的主要结构蛋白，大多中和表位都存在于VP2蛋白上，故其能够诱导机体产生对BTV的中和反应。VP2蛋白由L2基因编码。有数据表明L2基因在各血清型间差异较大，L2基因的变异与BTV血清型之间有密切联系，证明VP2蛋白为型特异性蛋白，可以用来区别BTV各血清型间的不同，因此VP2蛋白血清型的主要决定因素。

BTV呈现蔓延趋势，近些年不断出现新疫情。BTV具有多型性，并且其不断变异，目前已经分离出27个血清型，不同血清型之间无交叉免疫力。同时，4型BTV能感染绵羊、骆驼等反刍动物，其发病急，死亡率高，对养殖业造成的损害巨大。因此，建立型特异性鉴别诊断方法从而防控BTV尤为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种4型蓝舌病病毒VP2蛋白的中和性B细胞抗原表位多肽及其在检测蓝舌病病毒中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明应用噬菌体随机肽库对自行制备成功的4A-1G7单抗进行3轮生物淘选，测序后结果为：12个噬菌体序列一致含有NH，这与4型BTV VP 2氨基酸序列160-161位氨基酸有一定的相似度。为了进一步对该序列进行鉴定，合成该短肽序列¹⁶⁰NH¹⁶¹，采用间接ELISA方法与24个血清型的BTV阳性血清反应，结果发现该短肽¹⁶⁰NH¹⁶¹可与大多数阳性血清呈现明显的阴性反应，与少数几种血清反应呈现阳性。并且¹⁵⁸AMNSY¹⁶²，¹⁵⁸AMNHNSY¹⁶²与BTV-4标准阳性血清分别反应，含有¹⁶⁰NH¹⁶¹片段的反应性更强。该结果表明，该抗原表位具有良好的特异性。此外，噬菌体竞争抑制试验与ELISA方法证实筛选出的噬菌体多肽的空间构象和天然抗原表位相似，因此提示该短肽可用于4型BTV相关表位疫苗的制备。

因此，在上述研究的基础上，本发明提出了一种4型蓝舌病病毒VP2蛋白的中和性B细胞抗原表位多肽，所述的抗原表位多肽含有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。