[发明专利]耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法

说明书

本发明公开了耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的定性PCR检测方法。本发明首先公开了检测耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的3对特异性PCR检测引物对。本发明进一步建立一种耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的定性PCR检测方法。特异性、灵敏度及检出限实验证明，本发明耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的定性PCR检测方法具有高度特异性，灵敏度度高，且检出限低。本发明还公开了一种耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的定性PCR检测试剂盒。本发明耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的定性PCR检测方法或试剂盒适用于耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的定性检测。

技术领域

本发明涉及耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法，属于耐除草剂大豆的定性检测领域。

背景技术

近年来，随着基因工程技术的飞速发展，转基因作物种植面积和转基因作物品种都大量增加，同时转基因植物及其产品安全性也引起全球范围内的关注和担忧。为了有效监管转基因植物及其产品，保障消费者的合法权益，目前，包括中国在内的全世界50多个国家颁布并实施了转基因生物安全标识制度和配套的管理规定。中国的基因工程育种技术发展迅速，近年来育成了一系列的转基因品种作物，因此制定相关的转基因生物安全评价方法显得尤其重要。

在转基因作物及其产品安全检测方法中，PCR技术以其灵敏度高、稳定性好、准确性强、操作简便成为国际上转基因植物及其产品检测的主要方法，中国近年来颁布的转基因生物及其产品安全评价方法也是以PCR检测方法为主。根据检测目的基因的不同，PCR检测方法分为筛查、基因特异性、构建特异性和转化体特异性检测；其中，转化体特异性检测方法的特异性最高，筛查检测和转化体特异性检测方法是实际检测中应用最广泛的方法。筛查检测方法主要用于初步检测样品中是否含有转基因成分，转化体特异性检测方法可以准确确定转基因植物的身份。

转基因耐草甘膦大豆SHZD32-1由上海交通大学研发，利用农杆菌介导法将密码子经优化的耐草甘膦基因G10-EPSPS导入了栽培大豆品种“中豆32”获得转G10-EPSPS基因的耐草甘膦大豆SHZD32-1。G10是一个新的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因。温室试验和中间试验表明，转G10基因耐草甘膦大豆的耐草甘膦性能良好，能够达到耐除草剂的运用水平，已经获批进行环境试验。到目前为止，中国尚未发布专门针对耐草甘膦大豆SHZD32-1及其衍生品种检测的方法，迫切需要尽快制定相关检测方法，为中国转基因生物安全管理部门实施各项安全管理制度提供科学方法和技术支撑。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供用于检测耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的特异性PCR检测引物对；

本发明所要解决的第二个技术问题是建立一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明根据耐除草剂大豆SHZD32-1的RB(5′端)和LB(3′端)两端侧翼序列，在分析两侧翼序列的基础上，在左边界设计了8条正向引物和8条反向引物，右边界设计7条正向引物和8条反向引物，选择左右边界扩增片段长度均在150～400bp之间的40对引物用于测试。本发明分别以1％和0.1％两个浓度的大豆DNA为模板，使用常规体系和扩增条件进行PCR扩增，对上述40对引物进行初步筛选。根据引物的扩增特异性、稳定性及灵敏度，本发明筛选获得扩增效果较好的3对特异性检测引物，能够用于耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测，所述3对特异性PCR检测引物的序列如下：

引物对1(RB6F/5R)：由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列组成；

引物对2(RB5F/5R)：由SEQ ID No.3和SEQ ID No.2所示核苷酸序列组成；