[发明专利]一种检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法

说明书

技术领域

本发明涉及生化分析技术领域，尤其涉及一种检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法。

背景技术

胆固醇存在于动物的所有组织中，是细胞的组分，也是维生素和前列腺素的前体和血中脂类的转移因子，是动物体维持正常生理活动所必需的。然而，过多的摄入胆固醇可引起高血脂、血栓进而引发动脉粥样硬化等一系列心血管疾病。禽蛋是自然界中营养最为丰富的食品之一，但是蛋黄中的高胆固醇也引起人们的高度关注，鉴于胆固醇类组分对人体的影响，人们不断采取各种各样的手段来控制胆固醇摄入量。因而测定禽蛋中胆固醇含量即显得十分重要。

目前胆固醇的测定方法主要有：化学比色法、色谱法等。化学比色法是测定胆固醇含量的传统方法，包括抽提法和直接测定法。该方法重现性良好，但比色比较耗时，即使连续操作也需要16个小时以上，一般当天不可能完成试验，所用化学试剂毒性大且比较昂贵，并且测定结果偏高；色谱法如：薄层层析法、气相色谱法和液相色谱法。这些方法都需要特殊设备，并且维持费用也很昂贵，普通实验室一般都难以承受，并且操作步骤复杂，对试剂和仪器的要求很高，因此难于推广使用；而酶测定法敏感、特异、快速，并能自动化分析。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，包括如下步骤：

步骤1：制备待分析试液；

步骤2：绘制胆固醇溶液的吸光度随浓度变化的标准变化曲线；

步骤3：在待分析试液中加入显色剂，进行显色反应，测量其吸光度；

步骤4：根据待分析试液的吸光度与所述标准变化曲线计算待分析试液的胆固醇含量；

其中，所述步骤1具体包括：

步骤1.1：制备禽蛋样品，并对其进行皂化；

步骤1.2：对皂化后的所述禽蛋样品进行萃取，得到萃取液；

步骤1.3：将所述萃取液制备成待分析试液。

本发明的有益效果是：本发明的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，可以准确的检测出禽蛋中的胆固醇含量水平，稳定性较好，可以适用于给禽蛋和蛋制品中胆固醇含量的检测，通用性较强，检测效率较高，耗时短，成本低，无需昂贵的检测设备即可准确完成检测，适合大面积推广。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步：所述步骤1.1中，所述禽蛋样品为全蛋样品，所述全蛋样品的制备过程包括：选取禽蛋，去掉蛋壳，将蛋黄和蛋清充分混匀。

进一步：所述步骤1.1中，所述禽蛋样品为蛋黄样品，所述蛋黄样品的制备过程包括：选取禽蛋，去掉蛋壳和蛋清，用滤纸吸干蛋黄表面的蛋清，再将蛋黄充分混匀。

进一步：所述步骤1.1中，对所述禽蛋样品进行皂化的过程包括：取禽蛋样品1.00-2.00g，并加入皂化剂，在60-70℃的温水中水浴50-70min；其中，所述皂化剂由体积为5-15mL、浓度为600g/L的氢氧化钾溶液和体积为15-25mL的甲醇混合组成。

进一步：所述步骤1.2中，将皂化后的所述禽蛋样品冷却至室温，加入15-25mL水，加入萃取剂萃取，得到萃取液。

进一步：所述步骤1.2中，得到所述萃取液后，还向所述萃取液加入浓度为50g/L的氯化钠溶液3-4mL，再将所述萃取液水洗至酸碱中性。

进一步：所述步骤1.3中，将所述萃取液转至鸡心瓶中，在45-55℃的温水中水浴旋转蒸干，用无水乙醇溶解定容至10mL，制得待分析试液。

进一步：所述步骤2中，配置一系列已知浓度的胆固醇溶液，加入所述显色剂并进行显色反应，分别测量其吸光度，并绘制胆固醇溶液的吸光度随胆固醇浓度标准变化曲线。

进一步：所述步骤2和步骤3中，所述显色剂包含80～100U/L胆固醇酯酶、40～60U/L胆固醇氧化酶、1000～1500U/L过氧化物酶、170.0-175mg胆酸钠、10.0-10.5mg4-氨基安替比林、30.0-35.0mg苯酚和280.0-320mg聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.3mol/L的磷酸盐缓冲溶液，且所述显色反应的显色时间为10-20min，显色温度为35-40℃。

进一步：所述步骤4中，根据待分析试液的吸光度在所述标准变化曲线上读取待分析液中胆固醇的浓度，并根据待分析液中胆固醇浓度计算待分析试液的胆固醇含量，具体公式为：