[发明专利]一种肺癌监测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明提供一种肺癌监测试剂盒及其使用方法。该试剂盒包括：试剂A：浓度为10mM的碳酸氢铵溶液中加入5%的SDS配制而成；试剂B：浓度为3.3%NP40中加入不少于2.2单位/μL糖苷外切酶配制而成；试剂C：等体积20mM APTS的1.2M柠檬酸和1M有机物还原剂的DMSO的混合液；试剂D：0.25μL浓度为100mM、pH 5的NH₄AC，0.2μL的唾液酸酶，2.55μL双氧水。该试剂盒基于检测血液糖蛋白中寡糖链的指纹图谱作为诊断指标对肺癌患者进行了评估，以诊断肺癌的肿瘤分期；可以让众多肺癌患者接受常规、无创检测，帮助医药工作者检测肺癌，并能够及时监测疾病进展。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种肺癌监测试剂盒及其使用方法。

背景技术

在世界范围内，无论男性还是女性，肺癌均已成为癌症死亡的主要原因。2005年估计中国肺癌的新发病例大约有500,000例（男性约330,000例，女性约170,000例），2007年美国肺癌的新发病例估计有213,380例，死亡160,390例在世界范围内。肺癌高死亡率的主要原因有二个：一是肺癌缺乏有效的早期诊断手段，70%以上的病人在确诊时已属晚期；二是晚期肺癌（尤其是非小细胞肺癌，NSCLC）对化疗的敏感性差，现有的各种化疗方案对NSCLC的总体有效率仅为30%左右。

肺癌按解剖学部分分类可分为2类：中央型肺癌和周围型肺癌。中央型肺癌发生于肺段或肺段以上的支气管,主要为磷状上皮癌、小细胞癌、大细胞癌及类癌。周围型肺癌发生于肺段以下的支气管，见于各种组织学类型。其基本大体病理形态为肺内结节或肿块。肺癌组织病理学分类为两种基本类型，第一种是非小细胞型肺癌，另外一种是小细胞肺癌。肺癌的诊断目前主要通过以下几种方法，胸部影像学检查是诊断肿瘤最重要的方法之一，对早期诊断肺癌有重要意义。支气管镜除能直接观察病变形态特征及支气管狭窄情况外，还能通过经支气管镜肺活检、经纤支镜针吸细胞学检查（TBNA）等直接选取组织进行病理检查，提高肺癌的诊断率，并对肺癌(尤其是NSCLC)分期具有重要指导作用。支气管内超声检查（EBUS）是在支气管镜引导下，通过超声探头对支气管腔内、气管及周围组织进行检查与治疗的方法。自动荧光支气管镜（AFB）是利用细胞自发性荧光和电脑图像分析技术开发的新型纤维支气管镜，可明显提高气管镜对肺癌及癌前病变早期诊断的敏感性。电磁导航支气管镜（ENB）结合传统支气管镜与螺旋CT仿真支气管镜的优点，可提高常规支气管镜对周围肺病灶的阳性检出率。光干涉断层扫描（OCT）是将红外线分为两束光，一束直接照射，另一束经过反射再照射，两束光重叠产生光干涉现象，检测各层光反射的强弱和时间延迟，并经计算机处理，即得出与B型超声、CT类似的二次断层图像, 其获得的反射图像高于以往任何方法的分辨率和敏感性。痰脱落细胞检查是诊断肺癌的重要手段，如痰标本收集方法得当，连续3次以上痰标本检查可提高中央型肺癌诊断率达80%，周围型肺癌诊断率达50%。肿瘤标志物检测方法简单、创伤小、可重复性好，是临床筛选及早期诊断肿瘤的首选方法，其在机体特定部位的表达对肿瘤的诊断相对特异。诊断肺癌常用的肿瘤标志物有癌胚抗原(CEA)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、CA-125、肺癌相关抗原、血管内皮生长因子、增生细胞核抗原、表皮生长因子受体等。

糖蛋白分子由多肽链和糖两部分组成。血清糖蛋白中任何变化可以反映人体的生理改变。近年来的糖组学研究也显示了寡糖链的改变与各种肿瘤的发生和发展有密切的相关性（参考文献：Liu，X-E，Desmyter，L，Gao，C-F，Laroy，W，Dewaele，S，Vanhooren，V，Wang，L，Zhuang，H，Callewaert，N，Libert，C，Contreras，R，Chen，C.N-Glycomic changes inhepatocellμLar carcinoma patients with liver cirrhosisinduced by hepatitis Bvirus.Hepatology，46，1426-1435，2007.）。

鉴于肺癌监测的不确定性，目前迫切需要一种能有效监测肺癌的试剂盒和监测评估方法。