[发明专利]磷酸化壳聚糖作为免疫佐剂在疫苗治疗中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物材料及免疫治疗领域，具体涉及一种磷酸化壳聚糖作为免疫佐剂在疫苗治疗中的应用。

背景技术

壳聚糖因具有良好的生物相容性、生物活性、生物可降解性、生物粘附性等优点而被广泛研究。有研究证明，壳聚糖作为抗原递送载体可显著提高亚单位疫苗的免疫活性。然而由于壳聚糖只溶解在稀酸条件下，这使其在生物医学应用领域受到很大的限制。为了克服此缺点，研发人员将壳聚糖进行水溶性改性并用于制备免疫佐剂已经有较多的报道。目前国内外更多的研究是将壳聚糖季铵化，并用于提高亚单位疫苗的IgG抗体效价和血凝抑制抗体水平(Amidi,M.,et al.,N-Trimethyl chitosan(TMC)nanoparticles loaded with influenza subunit antigen for intranasal vaccination:Biological properties and immunogenicity in a mouse model[J].Vaccine,2007.25(1):p.144-153.)。而壳聚糖含磷衍生物磷酸化壳聚糖除了具有壳聚糖的优点外，最重要的是具有良好的水溶性，因此在生物医学应用领域备受关注。目前对磷酸化壳聚糖的研究集中在合成、表征及其组织再生与修复应用方面(孙国栋，李志忠等，壳聚糖/亚磷酸化壳聚糖复合海绵复合人脐带间充质干细胞用于异位成骨的实验研究，中国修复重建外科杂志，2011年12期)，而尚没发现将磷酸化壳聚糖(PCS)作为免疫佐剂用于疫苗治疗的相关研究。

随着现代医学技术的发展，疫苗已经被视为可最有效地防止和根除威胁生命的传染病如肝炎、肺结核等，可保护机体免受不同病原体的感染。大部分传统疫苗来源于具有良好免疫原性的病原体浆液或裂解物，然而此类疫苗的不彻底减毒和灭活将会引发一系列安全问题。随着现代生物技术的发展，不同类型的新型疫苗被广泛开发如重组亚单位疫苗、DNA疫苗和合成肽疫苗，然而即使该类疫苗具有较高的纯度和安全性，不足的是他们具有免疫原性较低等缺点。因此设计具有更高的免疫原性、安全性，同时能有效增强机体特异性免疫应答的免疫佐剂成为首要任务。免疫佐剂是一类能帮助递送抗原、活化抗原递呈细胞(APC)并引发机体免疫细胞的活化与分化的非特异性免疫刺激分子。理想的免疫佐剂必须包括以下几个条件：他们必须便宜且可规模生产；他们必须安全用于人体；他们可提高抗原的免疫原性并增强体液和细胞免疫应答。而目前传统的佐剂主要是弗氏完全佐剂和铝佐剂。弗氏完全佐剂主要用于实验室，虽然能有效提高机体的体液和细胞免疫反应，但对机体具有毒副作用。而铝佐剂是唯一一种被批准用于临床治疗的佐剂，但具有诱导细胞免疫能力较弱和引发局部炎症反应等缺点。因此研究开发新型、安全并且能有效诱导细胞和体液免疫的免疫佐剂具有重大的意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种磷酸化壳聚糖作为免疫佐剂在疫苗治疗中的应用。用于增强机体抗原特异性免疫应答。

本发明所要解决的第一个技术问题是，提供一种水溶性的磷酸化壳聚糖作为疫苗佐剂。为解决该技术问题，本发明采用均相法合成水溶性磷酸化壳聚糖。作为免疫佐剂，所述的磷酸化壳聚糖能溶于生理盐水中，且磷酸化壳聚糖生理盐水溶液浓度设置分别为1mg/mL、10mg/mL、30mg/mL。

本发明要解决的第二个技术问题是，提供制备的磷酸化壳聚糖作为免疫佐剂用于疫苗治疗的应用。所述的疫苗治疗免疫方式为腿部肌肉注射，所述的疫苗为模型疫苗卵清蛋白OVA抗原。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明提供一种磷酸化壳聚糖作为免疫佐剂的应用。

所述的磷酸化壳聚糖作为免疫佐剂在疫苗治疗中的应用。

所述的疫苗治疗免疫方式为腿部肌肉注射；

所述的疫苗为模型疫苗卵清蛋白OVA抗原；

配制磷酸化壳聚糖/OVA生理盐水溶液，其为1～30mg/mL PCS/OVA；优选为10～30mg/mL PCS/OVA；更优选为30mg/mL PCS/OVA。

所述的疫苗治疗方法主要包括以下步骤：

1)配制浓度梯度的磷酸化壳聚糖/OVA生理盐水溶液，分别为1mg/mLPCS/OVA、10mg/mL PCS/OVA、30mg/mL PCS/OVA。

2)分别用不同浓度的磷酸化壳聚糖/OVA生理盐水溶液免疫小鼠。对小鼠进行三次腿部肌肉注射，每次注射间隔时间为10天。