[发明专利]苗期水培接种快速鉴定番茄颈腐根腐病抗性植株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蔬菜抗病育种技术领域，特别涉及一种苗期水培接种快速鉴定番茄颈腐根腐病抗性植株的方法。

背景技术

番茄(Solanum esculentum L.)是我国重要的蔬菜作物之一，营养丰富，可以周年种植，并且产量越来越高，品种花色越来越多，用途广泛，深受种植者和消费者喜爱。据2014年联合国粮食及农业组织(FAO)统计，我国番茄种植面积和产量均居世界首位，种植面积约1500多万亩，产量约5260万吨。但是在番茄长期、大面积的生产过程中，其病害也随之发展，危害加重，尤其是近年来番茄颈腐根腐病(Fusarium crown and root rot,FCRR)的大面积暴发，并有进一步发展的趋势。番茄颈腐根腐病是由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.radicis-lycopersici，FORL)引起的最具破坏性的番茄土传病害之一(Jarvis and Shoemaker,1978；Roberts et al.,2000)。该病害在世界各地普遍发生，首先于1974年在日本发现(Sato and Arak,1974)，之后在美国、加拿大、墨西哥、以色列、韩国、中国等许多国家陆续被发现(Scott and Jones,2000；Scott,2005)，该病对多数国家的番茄生产造成极大威胁。近些年，番茄颈腐根腐病在我国山东、东北、河北、北京、江苏、浙江等番茄主产区大范围发生，误诊或防治不及时，番茄发病率达80％以上，致死率达30％以上，造成严重减产，给种植户造成严重的经济损失(程琳等，2016)。由于近年来此病害危害在我国有逐年扩大的趋势，对于番茄颈腐根腐病的防治，目前较好的办法是选育抗病品种。

在番茄抗病育种过程中，需要鉴定后代品系的抗性。当前所应用的抗病鉴定方法是田间自然鉴定和温室人工接种鉴定。田间自然鉴定是将试验设立在田间发病区，并在利于病害流行的自然条件下进行，然而，田间影响番茄颈腐根腐病发生的因素有很多，如气候条件、土壤环境及微生物数量等，该方法鉴定时间较长、结果的稳定性不高、重复性较差，不同年分鉴定结果可能存在差异；温室人工浸根接种鉴定，条件可控，此方法能克服田间自然抗性鉴定结果重复性差的缺点，但是鉴定时间较长，要求12天以上。

发明内容

本发明的目的在于提供一种苗期水培接种快速鉴定番茄颈腐根腐病抗性植株的方法，能提高番茄抗颈腐根腐病品种筛选的育种效率，同时为研究番茄抗病种质资源筛选、抗病分子机理等提供简易快速的检测方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种苗期水培接种快速鉴定番茄颈腐根腐病抗性植株的方法，包括如下步骤：

(1)准备待鉴定番茄幼苗；以不同番茄品系为材料，各品系选取健康饱满的番茄种子20-30粒，放入培养皿中，加水没过番茄种子，将培养皿放入25℃培养箱中催芽4d，选取萌发正常的种子播种于灭菌后的育苗培养基质中，进行培养，幼苗长到2-4片真叶，挑选健康、均匀一致的幼苗作为待鉴定番茄幼苗，备用；

(2)制备番茄颈腐根腐病原菌孢子液：将番茄颈腐根腐病原菌接种于PDA培养基中，置于22℃下培养15天，将菌丝刮入到无菌水中，再配制成孢子浓度为1-3×10⁶个孢子/ml的悬液得番茄颈腐根腐病原菌孢子液；

(3)病原菌侵染处理：将步骤(1)的待鉴定番茄幼苗从育苗培养基质中取出，清洗后得自然伤根幼苗，然后将自然伤根幼苗插入以步骤(2)的番茄颈腐根腐病原菌孢子液为培养液的水培装置中，保证仅自然伤根幼苗的根部浸入培养液中；

(4)抗病性检测：分别于侵染处理后的3天、4天、5天、6天，调查侵染苗的发病状况，根据番茄颈腐根腐病病情分级标准确定0、1、2、3共4个发病等级，再根据该发病等级计算病情指数，最后根据发病率和病情指数鉴定植株抗病能力。

发病率和病情指数按0～4级进行鉴定(参考文献：Manzo D.,Ferriello F.,Puopolo G.,Zoina A.,D’Esposito D.,Tardella L.,Ercolano M.R.Fusarium oxysporum f.sp.radicis-lycopersici induces distinct transcriptome reprogramming in resistant and susceptible isogenic tomato lines.BMC plant biology,2016,16(1):53.)。