[发明专利]一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法

权利要求书

1.一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法，其特征在于：该基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法的具体步骤如下：

S1：挑选籽粒饱满的小麦种，置于小烧杯中先用蒸馏水冲洗三次，并用75％的酒精溶液浸泡1min，然后再用蒸馏水冲洗三次，每次1min,除去小麦种子上的酒精残留，冲洗后再用蒸馏水浸泡45～60min，之后再用蒸馏水冲洗一次；

S2：浸泡后将种子分装在培养皿中，并放置在恒温培养箱中，恒温温度25℃，湿度为33％，且在小麦种培养期间早、中、晚定时加水换水，每天记录小麦的发芽率，培养15天左右；

S3：将培养后的小麦苗的第二片叶从根部剪下若干，并将叶片用清水冲洗后再用蒸馏水进行清洗，之后用吸水纸吸干，摆放整齐后备用；

S4：将透明塑料胶带拉开10～15cm，胶面朝上平放在实验台面上，捏住叶片被剪端，将叶片正面粘在胶带上并将叶片对折粘在叶片的背面，使胶带与叶片的两端紧密粘接；

S5：将对折的胶带撕开，将粘有叶片下表皮的胶带沿表皮轮廓剪成1cm×1cm的正方形胶片，并在载玻片上滴2滴蒸馏水和1滴1％的碘-碘化钾染液，将粘有叶片下表皮的胶带胶面向下放在载玻片上，染色1min，并盖上玻片；

S6：调节数码显微镜，放大倍数40×10，并导入显微镜图像处理软件系统进行拍照，对气孔形态进行观察；

S7：对显微镜图像采用多聚焦图像融合技术进行处理，将多张不同焦距的图像经过融合处理后，提取各自的清晰信息综合成一幅新的视场范围更大清晰范围更大的图像，便于人眼进行观察；

S8：针对处理后的显微镜图像进行图像识别，并统计图像上的气孔数量，根据叶片的实际尺寸，得到实际的气孔密度。

2.根据权利要求1所述的一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法，其特征在于：所述步骤S2中，在培养皿的底部垫上一层滤纸，避免水分蒸发过快，同时用保鲜膜将培养皿包裹后在其顶部保鲜膜上针扎若干小孔，便于小麦种呼吸。

3.根据权利要求1所述的一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法，其特征在于：所述步骤S4中，左手捏住叶片被剪的一端使叶片正面粘在胶带上，在粘贴过程中先将叶片粘贴在胶带上，然后将叶片向叶正面弯曲并逐渐向前慢慢推进，使叶片正面与胶带充分接触，为了防止粘贴过程中叶片皱缩，应右手拿解剖针置于叶片与胶带之间进行调整，使叶片平整的粘贴在胶带上，将胶带对折粘在叶片的背面并用手指对捏胶带使叶片与胶带之间紧密粘接。

4.根据权利要求1所述的一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法，其特征在于：所述步骤S5中，在胶带揭开的过程中，叶片的正面仍粘在胶带上，背面与胶带分离，将叶片下表皮粘在胶带上。

5.根据权利要求1所述的一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法，其特征在于：所述步骤S6中，在对叶片的气孔形态特征进行观察时，将叶片制成3个临时装片在40×10倍数码显微镜下观察，每一装片上选取10个视野进行拍照，即每个叶片共30幅图片。

6.根据权利要求1所述的一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法，其特征在于：所述步骤S7中，在多聚焦图像融合技术针对图像边缘的检测中，应用一阶导数和二阶导数进行，其中一阶导数用于检测图像中的一个点是否为边缘的一个点，并通过二阶导数正负极值的虚拟连线的过零点来判断出边缘的中点。

7.根据权利要求1所述的一种基于显微图像的小麦叶片气孔密度测量方法，其特征在于：所述步骤S8中，在显微镜的图像识别过程中，根据图像的像素灰度、RGB值和频谱的图像基本特征进行识别。