[发明专利]一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的应用

权利要求书

1.一种生产阿洛酮糖的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在D-阿洛酮糖-3-差向异构酶存在下，对底物进行酶促反应，从而形成产物阿洛酮糖，其中所述D-阿洛酮糖-3-差向异构酶为类芽孢杆菌(Paenibacillus senegalensis)的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶，并且所述的底物包括果糖；和

(b)任选地，分离阿洛酮糖。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶选自下组：

(i)氨基酸序列如SEQ ID NO.:1所示的多肽；

(ii)将SEQ ID NO.:1所示氨基酸序列的多肽经过一个或多个氨基酸残基(较佳地，1-50个，更佳地，1-30个，更佳地，1-10个，最佳地，1-6个)的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信号肽序列后形成的、并具有催化产生阿洛酮糖活性的衍生多肽；

(iii)序列中含有(i)或(ii)中所述按氨基酸序列的衍生多肽；

(iv)氨基酸序列与SEQ ID NO.:1所示氨基酸序列的同源性≥70％(较佳地≥80％，更佳地≥90％)，并具有催化产生阿洛酮糖活性的衍生多肽。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶具有选自下组的一个或多个特性：

(p1)适合的pH：5-10，较佳地，6-9，更佳地，8-9；

(p2)适合的温度：20～80℃，较佳地，50-80℃，更佳地，60-70℃；

(p3)催化活性：在pH7.0和60℃为最佳反应条件下，催化活性为100％；

(p4)在pH7.0和60－70℃下，转化反应2h，转化率为5-30％，较佳地，25-30％；

(p5)在最适pH±0.5下，在80℃下的催化活性A80与在60℃下的催化活性A60之比(A80/A60)≥50％(如50-80％)，较佳地≥60％(如60-65％)；

(p6)在最适pH±0.5下，在50℃下的催化活性A50与在60℃下的催化活性A60之比(A50/A60)≥50％(如50-80％)，较佳地≥60％(如60-65％)；

(p7)在最适pH±0.5下，在45℃下的催化活性A45与在60℃下的催化活性A60之比(A45/A60)≥50％(如50-80％)，较佳地≥60％(如60-65％)；

(p8)在T1温度下，在pH5.5下的催化活性ApH5.5与在pH7下的催化活性ApH7之比(ApH5.5/ApH7)≥60％(如60-90％)，较佳地≥65％(如65-80％)；

(p9)在T1温度下，在pH8下的催化活性ApH8与在pH7下的催化活性ApH7之比(ApH8/ApH7)≥60％(如60-90％)，较佳地≥65％(如65-80％)；

(p10)在T1温度下，在pH9.5下的催化活性ApH9.5与在pH7下的催化活性ApH7之比(ApH9.5/ApH7)≥60％(如60-90％)，较佳地≥65％(如65-80％)；

(p11)在T1温度下，在pH10下的催化活性ApH10与在pH7下的催化活性ApH7之比(ApH10/ApH7)≥60％(如60-90％)，较佳地≥65％(如65-80％)；

其中T1为40-70℃中任意温度，较佳地T1为50、60、65℃。

4.一种催化反应体系，其特征在于，所述的反应体系包含(A)D-阿洛酮糖-3-差向异构酶；(B)反应底物，所述反应底物包括果糖；和(C)缓冲体系。

5.如权利要求4所述的催化反应体系，其特征在于，在所述反应体系中，所述底物的浓度(w/w)为1-80％，较佳地，3-70％，更佳地，8-65％，按反应体系的总重量计算。

6.如权利要求4所述的催化反应体系，其特征在于，在所述反应体系中，所述差向异构酶的浓度(w/w)为1-20％，较佳地，2-10％，更佳地，3-7％，按反应体系的总重量计算。