[发明专利]一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的组合物包含抗肿瘤因子、胶原蛋白、多糖物质和活性因子；

所述免疫增强抗肿瘤胶原组合物采用以下方法制备：

（1）组织前置处理：取动物小肠粘膜下层组织材料，清洗并将水滤干；

（2）病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡动物小肠粘膜下层组织材料进行病毒灭活，然后进行超声清洗；

（3）免疫原去除：免疫原去除液采用加入胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，免疫原去除过程在多频超声装置中进行，然后进行超声清洗；得到动物小肠粘膜下层基质材料；

所述免疫原去除液包括：胰蛋白酶、EDTA和pH值为6-8的PBS溶液；所述免疫原去除液中胰蛋白酶质量百分比浓度为0.01-0.2%，EDTA的浓度为0.1-1mmol/L；所述免疫原去除液pH值为7.0-8.0；所述免疫原去除液与小肠粘膜下层组织材料体积比为(20-40)︰1；所述超声装置至少具有两个超声频率，其中低频频率范围为20-40KHz，高频频率为60-90KHz，其中低频处理5-40min，高频处理5-40min，温度范围为20-35℃；

（4）冷冻干燥：将一层或多层动物小肠粘膜下层基质材料固定于模具上，将模具放置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥；

（5）灭菌解析：采用环氧乙烷进行灭菌，并进行解析；

（6）肿瘤细胞培养：取自体或同种异体肿瘤切除组织，在MEM培养基中剪碎，体外培养传代后，分散为单个细胞，配制细胞培养液，向从步骤（4）得到的冻干的动物小肠粘膜下层基质材料上滴加细胞培养液；然后在培养箱中培养；

（7）肿瘤细胞灭活：肿瘤细胞培养完成后，将动物小肠粘膜下层基质材料与肿瘤细胞一同从培养基中取出，清洗后灭活肿瘤细胞；得到复合免疫增强剂肿瘤疫苗胶原组合物。

2.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述组合物以动物小肠粘膜下层组织材料制成。

3.根据权利要求2所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述动物为哺乳动物。

4.根据权利要求3所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述哺乳动物为猪或牛。

5.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述抗肿瘤因子为灭活后的肿瘤细胞形成的肿瘤疫苗；所述的肿瘤细胞包括乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌、肝癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫颈癌、肾细胞癌、甲状腺癌、急性髓性白血病、骨髓瘤、食管鳞状细胞癌、淋巴瘤细胞或它们的组合，所述的灭活具体的方式为紫外线法、热灭活法、深冷冻融法、戊二醛法或它们的组合。

6.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的胶原蛋白为包含I型、III型、IV型和VI型胶原蛋白的组合物；所述的多糖物质包含硫酸软骨素和透明质酸；所述的活性因子为包含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、整合素及生长因子的组合物。

7.根据权利要求1所述的免疫增强抗肿瘤胶原组合物，其特征在于：所述的组合物为能体内降解的片状或颗粒状组合物；所述的组合物体内降解的时间为1-3个月；所述片状的形态是长1-10cm，宽1-10cm，厚度0.1-1mm；所述颗粒状的形态的粒径为500μm以下。