[发明专利]用于筛选、纯化灰葡萄孢菌的改良培养基及其配制方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，具体是一种用于筛选、纯化灰葡萄孢菌的改良培养基及其配制方法。

背景技术

灰霉病是北方的保护地蔬菜非常重要的病害之一，茄科蔬菜以番茄、辣椒和茄子受害最重，20世纪70年代后期，灰霉病在我国发展迅速，危害日益严重，在早春造成大量烂果，造成减产普遍达20～30％，严重时甚至高达50％左右。农业上对番茄灰霉病的防治投入较大但是效果均不理想，而灰霉病病原菌灰葡萄孢菌又易对杀菌剂产生抗药性，而且还会带来环境污染、食品安全、抗药性等一系列问题。因此对于番茄灰霉病的防治迫切需要一种低毒、高效的防治措施，将病害损失控制在经济阀值以下。在众多防治方法中生物防治由于其低残留、低污染的特性而凸显出优势，成为目前研究的重点。

为了推进微生物防治灰霉病工作的发展，快速准确的获取灰霉病病原菌灰葡萄孢菌成为一项非常重要的工作。

目前培养灰葡萄孢菌常用的培养基是马铃薯－蔗糖－琼脂培养基或马铃薯－葡萄糖－麦芽汁－琼脂培养基等(PDA培养基)，这些培养基不但价格昂贵，培养菌种、孢子的效果还不稳定，且配制使用不方便，筛选效果不明显。

发明内容

本发明的目的在于解决上述技术问题，提供一种用于筛选、纯化灰葡萄孢菌的改良培养基，该改良培养基以易感染灰葡萄孢菌的番茄或圣女果为出发点，番茄中的果酸经高温煮沸后释放，使培养基整体的pH维持在3～4(灰葡萄孢菌的最适宜生长pH为3.5)，在促进灰葡萄孢菌生长的同时还能抑制杂菌的生长，而且番茄中含的中、微量元素，也能加快灰葡萄孢菌的生长，有利于灰葡萄孢菌的筛选和纯化。

为解决上述技术问题，本发明提供一种用于筛选、纯化灰葡萄孢菌的改良培养基，每1000mL培养基包含以下原料配方：番茄或圣女果300g、速效碳源20～30g、速效氮源20～30g、蒸馏水1000mL，其中速效碳源为葡萄糖，速效氮源为蛋白胨或玉米浆水解液。

优选地，每1000mL培养基包含以下原料配方：番茄或圣女果300g、葡萄糖20g、蛋白胨25g、蒸馏水1000mL或每1000mL培养基包含以下原料配方：番茄或圣女果300g、葡萄糖25g、玉米浆水解液30g、蒸馏水1000mL。

当需要配制固体培养基时需要添加琼脂粉30～40g，而配制液体培养基不需要琼脂粉。

为简单说明问题起见，以下对本发明所述的用于筛选、纯化灰葡萄孢菌的改良培养基均简称为本发明的改良培养基。

灰霉病高发于果蔬果实体上，故本发明选取容易感染灰葡萄孢菌的番茄或圣女果作为改良培养基的出发点，每100g新鲜的番茄中含有的营养物质如下：钙8mg～10mg；脂肪0.2g～0.3g；碳水化合物2g～4g；磷22mg～26mg；铁0.6mg～0.9mg；镁15mg～18mg；钾240mg～270mg；钠8mg～10mg；胡萝卜素0.3mg～0.5mg；维生素B 0.04mg；硫胺素0.3mg～0.4mg；核黄素0.01mg～0.02mg；烟酸0.5mg～0.7mg；维生素C 10mg～25mg；蛋白质含量为0.7g～0.9g，所含的糖主要是葡萄糖和果糖，果酸主要是柠檬酸和苹果酸。圣女果作为番茄的一个品种，其营养组分与番茄大体一样，但是圣女果果实较小，可避免在配制较小量培养基时因切取其中的某一部分造成的营养成分与整个果实有差别，所以本发明优选圣女果作为改良培养基的原料。

番茄(或圣女果)中丰富的中、微量元素能促进灰葡萄孢菌的孢子生长，使菌株生长成熟；丰富的果酸(其中主要为柠檬酸和苹果酸)配合灭菌时产生的高温能在一定程度上促进玉米浆水解液中不完全分解的多肽进一步分解为氨基酸，提高氮源的利用率；番茄碱是一种高效抗菌物，在筛选灰葡萄孢菌的过程中能抑制杂菌的生长，同时，高温煮沸后，番茄中的大量果酸得以释放，使培养基整体的pH维持在3～4(灰葡萄孢菌的最适宜生长pH为3.5)，在促进灰葡萄孢菌快速生长的同时，也能抑制杂菌的生长，有利于灰葡萄孢菌的筛选、纯化。