[发明专利]一种用于PCR扩增快速提取丝状真菌DNA技术

说明书

本发明涉及快速提取丝状真菌DNA技术，是一种用于PCR扩增快速提取丝状真菌DNA技术；按下述方法进行：1、在1.5mL离心管中加入裂解液为0.25％SDS30μL。2、尽可能少地挑取对数生长期中期未形成孢子的真菌菌丝加入1.5mL离心中，使菌丝在液面以下。3、盖紧1.5mL离心管盖子，100℃沸水浴10min，水浴过程中盖子崩开的离心管，弃之。4、水浴完成后迅速把离心管插入冰中，5min。5、离心管12000rpm离心3min，上清液即丝状真菌DNA，即可用于PCR扩增。较传统提取技术需4‑8小时才能完成，本发明提取丝状真菌DNA仅需0.5h。

技术领域

本发明涉及丝状真菌提取DNA技术领域，是一种快速提取丝状真菌DNA技术。

背景技术

随着对环境微生物研究的深入，尤其是食品有益微生物或有害微生物研究的深入，以及食品微生物对人体健康认识的提高，开始研究食品中微生物的物种组成规律，尤其丝状真菌。但研究丝状真菌物种组成规律的一个重要前提就是提取丝状真菌的DNA，而后通过PCR扩增18S或26S rDNA，测序后对丝状真菌进行种属鉴定。然而，由于目前对食品中丝状真菌DNA提取速度慢，提取效果不好，使得从事食品中丝状真菌研究者十分头疼。食品丝状真菌DNA提取难度较大。目前，DNA提取方法大多采用，溶菌酶法，液氮研磨法，SDS(十二烷基磺酸钠)，反复冻融法，或直接使用商业化得试剂盒。这些方法都有各自的不足，但提取时间长，费用高昂，是这些方法的共同不足之处。目前，丝状真菌DNA的提取方法步骤繁多，费用高昂。本发明提供一种快速简便，成本低的丝状真菌DNA提取技术。

发明内容

本发明提供了一种食品微生物丝状真菌DNA的提取方法，克服现有技术的不足，能有效解决食品微生物丝状真菌DNA提取时间长，费用昂贵的缺点。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种快速提取丝状真菌DNA的方法，选取对数生长期未形成孢子的真菌菌丝，用裂解液进行裂解提取DNA。

所述裂解液为十二烷基磺酸钠，质量百分比浓度为

提取丝状真菌DNA的方法包括以下步骤：

第一步，在离心管中加入质量百分比浓度为0.25至1SDS裂解液中；

第二步，挑取对数生长期未形成孢子的真菌菌丝加入所述SDS裂解液中；

第三步，盖紧离心管，沸水浴5-10min；

第四步，沸水浴完成后把离心管放入冰中，冰浴5-10min；

第五步，最后5000-12000rpm离心5-10min，取上清液即为丝状真菌的DNA溶液。

本发明与现有技术相比具有的有益效果为：本发明提取的丝状真菌DNA技术可广泛应用于各种食品微生物丝状真菌DNA的提取，提取时间短，在30min内可完成，不需要昂贵的试剂，提取成本。尽可能的少挑挑取菌丝，以免菌丝中的其他成分含量过高对PCR反应产生影响。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

1.在1.5mL离心管中加入裂解液为0.25％SDS 30μL。

2.尽可能少(挑取太多的菌丝影响PCR扩增)地挑取对数生长期中期未形成孢子的真菌菌丝(形成孢子的菌丝不可用)加入1.5mL离心中，使菌丝在液面以下。

3.盖紧1.5mL离心管盖子，100℃沸水浴10min，水浴过程中盖子崩开的离心管，弃之。

4.水浴完成后迅速把离心管插入冰中，5min。